Trx真核表達(dá)載體的構(gòu)建及ROS調(diào)控INS-1細(xì)胞胰島素分泌機(jī)制的初步研究.pdf_第1頁(yè)
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1、胰島素分泌的調(diào)控是糖尿病治療中的一個(gè)十分重要的課題。已有研究表明活性氧(ROS)作為信號(hào)分子參與胰島素分泌的調(diào)節(jié),但其調(diào)控的分子機(jī)制尚不清楚。PTEN為β細(xì)胞中的一種磷酸酶,能夠負(fù)調(diào)控PI3K/Akt信號(hào)通路,降低Akt的磷酸化水平,從而影響胰島素分泌。PTEN的Cys124位點(diǎn)為催化活性中心,易被ROS氧化失活,而硫氧還蛋白(Trx)可使PTEN的氧化可逆恢復(fù)。本文通過(guò)RT-PCR方法成功構(gòu)建了Trx真核表達(dá)載體(pcDNA3.0-T

2、rx),并通過(guò)基因測(cè)序,質(zhì)粒的酶切電泳以及Western blot技術(shù)進(jìn)行了鑒定。同時(shí),初步研究了H2O2對(duì)INS-1細(xì)胞中胰島素分泌及PTEN蛋白表達(dá)水平、氧化水平的影響。研究過(guò)程中以H2O2為氧化因子刺激INS-1細(xì)胞,以DCFH-DA為探針檢測(cè)了胞內(nèi)的ROS水平的變化,以放射免疫法檢測(cè)了INS-1細(xì)胞分泌的胰島素水平,通過(guò)Western blot方法檢測(cè)了PTEN蛋白的表達(dá)及氧化水平。結(jié)果表明,5-400μM H2O2導(dǎo)致胞內(nèi)RO

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