攜胰島素調(diào)控基因系統(tǒng)的載體構(gòu)建及鑒定.pdf

1、目的:1型糖尿病是由于胰島細(xì)胞自身免疫損傷導(dǎo)致的單一蛋白質(zhì)胰島素絕對(duì)缺乏的一種代謝障礙性疾病,從而成為基因治療的適應(yīng)癥.但是無(wú)序的胰島素基因分泌不能使血糖保持在穩(wěn)定的生理范圍內(nèi),并產(chǎn)生極大的低血糖的危險(xiǎn).通過(guò)胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)插入到從鼠的肝臟中丙酮酸激酶(rLPK)的基因中提取的葡萄糖反應(yīng)元件(GLRE)聚合成三倍體(GLRE)3的下游,我們構(gòu)建了一個(gè)胰島素基因調(diào)控系統(tǒng),分別受胰島素抑制、葡萄糖激活,從而為構(gòu)建可

2、調(diào)控的胰島素表達(dá)載體奠定基礎(chǔ).該試驗(yàn)的目的是1:掌握從組織中提取DNA及PCR擴(kuò)增目的DNA技術(shù).2:掌握基因重組技術(shù)及鑒定方法.3:構(gòu)建重組的含胰島素基因調(diào)控系統(tǒng)的載體,為糖尿病基因治療的進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ).結(jié)論:1.可運(yùn)用飽和氯化納法從肝臟組織中調(diào)取基因組DNA;運(yùn)用PCR方法從肝臟基因組DNA中調(diào)取目的DNA:IGFBP-1;并運(yùn)用基因重組技術(shù)構(gòu)建攜胰島素調(diào)控基因系統(tǒng)的載體.2.酶切電泳、PCR及測(cè)序鑒定重組體中IGFBP-1基因