雙酚A誘導(dǎo)大鼠胰島INS-1細(xì)胞DNA損傷及機(jī)制探討.pdf

1、目的:雙酚A(Bisphenol A，BPA)是一種雌激素干擾物，廣泛用于聚碳酸酯和環(huán)氧樹(shù)脂的生產(chǎn)過(guò)程以及產(chǎn)品中。隨著塑料制品在日常生活中的廣泛應(yīng)用，人們暴露于雙酚A的機(jī)會(huì)也逐漸增多。許多動(dòng)物試驗(yàn)研究已經(jīng)證實(shí)雙酚A具有生殖毒性作用，并且能夠影響正常的代謝功能。也有研究表明，雙酚A能夠影響胰島細(xì)胞的功能并誘發(fā)胰島素抵抗。本試驗(yàn)旨在了解雙酚A是否會(huì)對(duì)INS-1細(xì)胞產(chǎn)生DNA損傷，并初步探討其可能存在的毒性效應(yīng)機(jī)制。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)選

2、擇大鼠胰島β細(xì)胞(INS-1)，在不同濃度雙酚A25、50、100μM條件下，采用單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)(SCGE)和蛋白質(zhì)印跡法(western blot)檢測(cè)雙酚A誘導(dǎo)的DNA損傷及DNA損傷相關(guān)蛋白表達(dá)的情況。為了進(jìn)一步探討研究這種DNA損傷的可能機(jī)制，本次試驗(yàn)采用熒光分子探針2'，7'—二氫二氯熒光素(DCFH)及羥基喜樹(shù)堿熒光素(OPT)的方法，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧類(lèi)物質(zhì)(ROS)和細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)的變化情況，并通過(guò)N-

3、乙酰半胱氨酸(NAC)的抗氧化干預(yù)試驗(yàn)，進(jìn)而說(shuō)明氧化應(yīng)激性損傷在DNA損傷中的作用。試驗(yàn)結(jié)果用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS v11.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:彗星試驗(yàn)顯示雙酚A能夠引起INS-1細(xì)胞DNA鏈斷裂，呈彗星樣拖尾，隨著雙酚A試驗(yàn)劑量的增加核DNA向彗星尾部遷移增多，尾長(zhǎng)增加，尾矩以及尾DNA％明顯增大，與DMSO溶劑對(duì)照組相比差別顯著，不同劑量組間差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。蛋白印跡法顯示DNA損傷相關(guān)蛋白p53及p-Chk2(T6

4、8)的表達(dá)水平明顯升高。發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)細(xì)胞內(nèi)活性氧類(lèi)物質(zhì)生成明顯增多，還原型谷胱甘肽水平顯著下降，提示了氧化應(yīng)激狀態(tài)存在。經(jīng)N-乙酰半胱氨酸(NAC)抗氧化劑干預(yù)后，顯示細(xì)胞內(nèi)活性氧物質(zhì)生成減少，同時(shí)細(xì)胞DNA鏈斷裂情況減輕，DNA損傷蛋白p53及p-Chk2(T68)的表達(dá)水平相應(yīng)下降。
　　結(jié)論:雙酚A能夠引起INS-1細(xì)胞的DNA損傷，造成DNA損傷蛋白(p53，p-Chk2(T68))的表達(dá)增加。雙酚A能夠誘導(dǎo)INS-1細(xì)胞中活