苦參堿對大鼠胰島素瘤INS-1細胞活性、胰島素分泌及抗氧化能力的實驗研究.pdf

1、糖尿病是以高血糖為特征的代謝疾病，而高血糖是由于胰島素分泌缺陷或胰島素作用缺陷引起的。糖尿病的發(fā)病與多個因素有關(guān)，如遺傳、自身免疫、環(huán)境等。糖尿病的患病率呈逐年遞增的趨勢，并且發(fā)病趨向低齡化。糖尿病的治療和預(yù)防已提上日程，在中藥治療糖尿病方面也有很大的發(fā)現(xiàn)。已經(jīng)有研究發(fā)現(xiàn)苦參堿有降低血脂、保護肝臟、提高機體免疫力、抗炎等作用，我們實驗室以前的實驗表明苦參堿可明顯抑制高脂性肥胖大鼠體重的增加，保護肝臟功能，增強抗脂質(zhì)過氧化能力，調(diào)節(jié)糖脂代

2、謝紊亂。也有研究報道苦參堿可以降低四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的含量。至于苦參堿為什么能調(diào)節(jié)糖代謝紊亂、降低血糖及將苦參堿應(yīng)用于胰島細胞研究糖尿病的防治機制，目前尚未見相關(guān)報道。因此本實驗將苦參堿應(yīng)用于體外培養(yǎng)的大鼠胰島素瘤INS-1細胞，以探討苦參堿調(diào)節(jié)糖代謝和降低血糖的作用機制。
　　 將體外培養(yǎng)的大鼠胰島素瘤INS-1細胞分為9組：①正常對照組；②苦參堿組；③鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)組；④苦參堿保護組；

3、⑤苦參堿修復(fù)組；⑥阿托品組；⑦阿托品+苦參堿組；⑧異搏定組；⑨異搏定+苦參堿組。INS-1細胞在培養(yǎng)板中培養(yǎng)24h后，觀察苦參堿對INS-1細胞的增殖活性、葡萄糖激發(fā)的INS-1細胞胰島素分泌量、苦參堿對INS-1細胞胰島素分泌量、苦參堿對STZ損傷的INS-1細胞的保護和修復(fù)作用以及苦參堿對STZ損傷的INS-1細胞的丙二醛(Malonaldehyde，MDA)和總抗氧化能力(Total Anti-Oxidation Competen

4、ce，T-AOC)水平的影響，流式細胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)測定其凋亡。
　　 實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差((-x)±s)和百分數(shù)表示，采用SPSS10.0軟件進行單因素方差分析和X2檢驗，分別P＜0.05、P＜0.01、P＜0.001被認為差異有顯著性。
　　 實驗結(jié)果如下：
　　 一.苦參堿對INS-1細胞增殖活性的影響
　　 1.苦參堿單獨作用對INS-1細胞增殖活性的影響
　

5、　 與正常對照組相比，低、中、高濃度苦參堿可以明顯提高INS-1細胞的增殖活性(分別P＜0.001，P＜0.05)。
　　 2.苦參堿對STZ損傷的INS-1細胞的增殖活性的影響
　　 與正常對照組相比，STZ組INS-1細胞增殖活性明顯降低(P＜0.001)；保護組低、中、高濃度苦參堿使INS-1細胞增殖活性明顯降低(分別P＜0.001，P＜0.01)；修復(fù)組高濃度苦參堿使INS-1細胞增殖活性明顯降低(P＜0.00

6、1)，修復(fù)組低、中濃度苦參堿對INS-1細胞增殖活性無明顯影響。與STZ組相比，保護組低、中濃度苦參堿使INS-1細胞增殖活性明顯增高(分別P＜0.05，P＜0.001)，保護組高濃度苦參堿對INS-1細胞增殖活性無明顯影響；修復(fù)組的低、中、高濃度苦參堿使INS-1細胞增殖活性明顯增高(均P＜0.001)。
　　 3.苦參堿對阿托品作用的INS-1細胞的增殖活性的影響
　　 與正常對照組相比，阿托品組INS-1細胞增殖活

7、性沒有明顯變化；阿托品+苦參堿低、中濃度的INS-1細胞增殖活性明顯增高(分別P＜0.05，P＜0.001)；阿托品+苦參堿高濃度的INS-1細胞增殖活性無明顯變化。與阿托品組相比，阿托品+苦參堿低、中濃度的INS-1細胞增殖活性明顯增高(分別P＜0.01，P＜0.001)；阿托品+苦參堿高濃度的INS-1細胞增殖活性沒有明顯變化。
　　 4.苦參堿對異搏定作用的INS-1細胞增殖活性的影響
　　 與正常對照組相比，異搏

8、定組INS-1細胞增殖活性明顯降低(P＜0.05)；異搏定+苦參堿低、中、高濃度組INS-1細胞增殖活性沒有明顯改變。與異搏定組相比，異搏定+苦參堿低濃度組INS-1細胞增殖活性明顯升高(P＜0.05)；異搏定+苦參堿中、高濃度組的INS-1細胞增殖活性沒有明顯改變。
　　 二.不同濃度的葡萄糖對INS-1細胞胰島素分泌的影響
　　 與正常對照組相比，5.6mmol/L和33.6 mmol/L濃度的葡萄糖對INS-1細胞

9、胰島素分泌量無明顯變化；8.4mmol/L、11.2mmol/L、16.8 mmol/L和22.4 mmol/L濃度葡萄糖使INS-1細胞胰島素分泌量明顯增多(分別P＜0.05，P＜0.001)。
　　 三.苦參堿對INS-1細胞胰島素分泌的影響
　　 1.苦參堿單獨作用對INS-1細胞的胰島素分泌的影響
　　 與距常對照組相比，苦參堿低、中、高濃度組INS-1細胞胰島素分泌量明顯增加(分別P＜0.001，P＜0

10、.05)。
　　 2.苦參堿對阿托品作用的INS-1細胞的胰島素分泌的影響
　　 與正常對照組相比，阿托品組INS-1細胞胰島素分泌量明顯降低(P＜0.05)；阿托品+苦參堿低、中、高濃度組INS-1細胞胰島素分泌量沒有明顯變化。與阿托品組相比，阿托品+苦參堿低、中濃度組INS-1細胞胰島素分泌量明顯增高(P＜0.05)；阿托品+苦參堿高濃度組INS-1細胞胰島素分泌量沒有明顯變化。
　　 3.苦參堿對異搏定作用

11、的INS-1細胞的胰島素分泌的影響
　　 與正常對照組相比，異搏定組INS-1細胞胰島素分泌量明顯降低(P＜0.05)；異搏定+苦參堿高濃度組INS-1細胞胰島素分泌量明顯降低(P＜0.05)；異搏定+苦參堿低、中濃度組INS-1細胞胰島素分泌量無明顯變化。與異搏定組相比，異搏定+苦參堿低濃度組INS-1細胞胰島素分泌量明顯增高(P＜0.01)；異搏定+苦參堿中、高濃度組INS-1細胞胰島素分泌量沒有明顯變化。
　　 四

12、.苦參堿對STZ損傷的INS-1細胞的胰島素分泌的影響
　　 與正常對照組相比，STZ組INS-1細胞胰島素分泌量明顯減少(P＜0.001)；保護組苦參堿低、中、高濃度組INS-1細胞胰島素分泌量沒有明顯改變；修復(fù)組苦參堿低、中、高濃度組INS-1細胞胰島素分泌量明顯降低(分別P＜0.05，P＜0.01)。與STZ組相比，保護組苦參堿低、中、高濃度組INS-1細胞胰島素分泌量分別明顯增多(分別P＜0.01，P＜0.001)；修復(fù)

13、組苦參堿低濃度組INS-1細胞胰島素分泌量明顯增多(P＜0.05)，修復(fù)組中、高濃度組INS-1細胞胰島素分泌量沒有明顯改變。
　　 五.苦參堿對STZ損傷的INS-1細胞的MDA和T-AOC的影響
　　 1.苦參堿對STZ損傷的INS-1細胞的MDA的影響
　　 與正常對照組相比，STZ組INS-1細胞MDA含量明顯增高(P＜0.001)；保護組低、中、高濃度苦參堿使INS-1細胞MDA含量明顯增高(分別P＜0

14、.05，P＜0.01，P＜0.001)；修復(fù)組低、中、高濃度苦參堿使INS-1細胞MDA含量明顯增高(分別P＜0.01，P＜0.001)。與STZ組相比，保護組低、中濃度苦參堿組使INS-1細胞MDA含量明顯降低(分別P＜0.05，P＜0.01)，保護組高濃度苦參堿組INS-1細胞MDA含量沒有明顯改變；修復(fù)組苦參堿低、中濃度苦參堿組INS-1細胞MDA含量明顯降低(分別P＜0.05，P＜0.01)，修復(fù)組高濃度苦參堿組INS-1細胞M

15、DA含量沒有明顯改變。
　　 2.苦參堿對STZ損傷的INS-1細胞的T-AOC的影響
　　 與正常對照組相比，STZ組INS-1細胞T-AOC明顯降低(P＜0.05)；保護組低濃度苦參堿組INS-1細胞T-AOC明顯增高(P＜0.05)，保護組中、高濃度苦參堿組INS-1細胞T-AOC沒有明顯變化；修復(fù)組低、中濃度苦參堿組INS-1細胞T-AOC明顯增高(P＜0.01)，修復(fù)組高濃度苦參堿組INS-1細胞T-AOC沒有

16、明顯變化。與STZ組相比，保護組低、中濃度苦參堿組INS-1細胞T-AOC明顯增高(P＜0.001)，保護組高濃度苦參堿組INS-1細胞T-AOC沒有明顯變化；修復(fù)組低、中濃度苦參堿組INS-1細胞T-AOC明顯增高(P＜0.001)，修復(fù)組高濃度苦參堿組INS-1細胞T-AOC沒有明顯變化。
　　 六.細胞形態(tài)及流式細胞術(shù)結(jié)果
　　 1.細胞形態(tài)
　　 鏡下觀察，正常對照組細胞透亮，形狀規(guī)則，呈梭形或多角形，貼

17、在培養(yǎng)板壁上；STZ組視野中細胞數(shù)目明顯減少，細胞從培養(yǎng)板壁落下或半貼壁狀態(tài)，細胞呈球形；保護組和修復(fù)組低、中、高濃度苦參堿組視野中INS-1細胞數(shù)量減少，細胞從培養(yǎng)板壁上脫落或半貼壁，細胞呈球形。保護組和修復(fù)組苦參堿各濃度組與STZ組比較INS-1細胞數(shù)量、形態(tài)沒有明顯改變。
　　 2.流式細胞術(shù)結(jié)果
　　 與正常對照組相比，STZ組處于G1期細胞數(shù)減少，幾乎沒有處于G2期的細胞，S期細胞數(shù)增多，凋亡細胞數(shù)增多；苦參堿

18、(10-6mol/L)+STZ組處于G1期細胞數(shù)減少，幾乎沒有處于G2期的細胞，S期細胞數(shù)增多，凋亡細胞數(shù)增多。與STZ組相比，苦參堿(10-6mol/L)+STZ組處于G1期細胞減少，G2期細胞和STZ組相同，S期細胞增多，凋亡細胞比STZ組明顯減少。
　　 實驗結(jié)果表明：苦參堿可以提高INS-1細胞的增殖活性，并促進其分泌胰島素；苦參堿可以對抗阿托品、異搏定降低INS-1細胞增殖活性和抑制胰島素分泌的作用；苦參堿可以提高ST