羅格列酮抑制大鼠胚肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化及膠原合成的機(jī)制.pdf

1、目的:特發(fā)性肺纖維化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是特發(fā)性間質(zhì)性肺炎中最常見的一種類型，肺纖維化目前發(fā)病機(jī)制尚不明確，病理以肺泡上皮細(xì)胞損傷，炎性細(xì)胞浸潤，肌成纖維細(xì)胞聚集，細(xì)胞外基質(zhì)成分堆積為主要特征。因此，炎癥反應(yīng)與增生性改變被視為IPF的兩個重要階段。
　　 羅格列酮屬于噻唑烷二酮類藥物，是過氧化物酶體增殖活化受體γ(PPAR-γ)的合成配體，PPAR-γ被配體激活后進(jìn)而發(fā)揮生物學(xué)作

2、用。臨床上PPAR-γ激動劑多用于治療2型糖尿病，但近幾年研究表明PPARγ激動劑羅格列酮能延緩肺纖維化進(jìn)程。羅格列酮可能通過調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞功能、促進(jìn)細(xì)胞凋亡及轉(zhuǎn)化、調(diào)節(jié)基底膜增厚反應(yīng)和細(xì)胞外基質(zhì)沉積等多種機(jī)制發(fā)揮對肺纖維化的抑制作用。博來霉素致大鼠肺纖維化模型證實(shí)了羅格列酮對肺纖維化的進(jìn)展有抑制作用。
　　 纖溶酶原激活物抑制劑-1（Plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1）是

3、絲氨酸蛋白酶抑制劑(SERPIN)家族員之一，纖溶系統(tǒng)的主要抑制物，可迅速、有效地抑制尿激酶型纖溶酶原激活劑(uPA)和組織纖溶酶原激活劑(tPA)的活性，并且本身還能與細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的玻璃結(jié)合蛋白成分結(jié)合，使其成為ECM的一個組分，是調(diào)節(jié)纖溶系統(tǒng)促進(jìn)肺纖維化發(fā)生的中心環(huán)節(jié)。
　　 目前國內(nèi)外已有關(guān)于PPAR-γ激動劑羅格列酮可以抑制PAI-1的表達(dá)進(jìn)而延緩腎臟纖維化進(jìn)程的報道，本研究中初步探討羅格列酮是否通過抑制PAI-

4、1的表達(dá)調(diào)節(jié)肺纖維化的病理生理過程，進(jìn)而延緩肺纖維化進(jìn)程，并初步探討羅格列酮延緩肺纖維化的可能信號機(jī)制。
　　 方法:
　　 1、將本科室液氮凍存的大鼠胚肺成纖維細(xì)胞復(fù)蘇
　　 2、羅格列酮對成纖維細(xì)胞的影響及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
　　 參照前人實(shí)驗(yàn)結(jié)果，羅格列酮最佳給藥濃度為30umol/L，根據(jù)我們前期研究結(jié)果，PAI-1最佳加藥濃度為20ug/ml，細(xì)胞分組:Control組、Rosiglitazone組(

5、30umol/L)、Rosiglitazone+PAI-1組(30umol/L+20ug/ml)，應(yīng)用westernblotting法分別測定24h、48h和72h小時PAI-1、α-SMA、AKT、P-AKT、ERK、P-ERK蛋白的表達(dá)，RT-PCR分別測定24h的PAI-1、α-SMA、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)。
　　 3、統(tǒng)計學(xué)處理
　　 數(shù)據(jù)用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差((X)±SD)表示，采用社會科學(xué)統(tǒng)計程序(St

6、atistical Progrom for Social Sciences 13.0)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，觀察組與對照組的樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。比較組間差異，有顯著差異者用S-N-K法進(jìn)行兩兩比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、成纖維細(xì)胞經(jīng)復(fù)蘇呈現(xiàn)圓球形約在4-5小時后貼壁，開始延伸，完全伸展后的細(xì)胞為梭形，細(xì)胞透亮，緊密連接，呈放射狀生長，相互連接，經(jīng)復(fù)

7、蘇后的細(xì)胞是第2代，實(shí)驗(yàn)選用3-5代。
　　 2、經(jīng)過羅格列酮干預(yù)后Rosiglitazone組肺成纖維細(xì)胞PAI-1的蛋白表達(dá)在24h較Control組即明顯降低，且作用可持續(xù)至72h;并且Rosiglitazone組肺成纖維細(xì)胞PAI-1的mRNA表達(dá)同樣較Control組明顯降低(P＜0.05)。
　　 3、Rosiglitazone組肺成纖維細(xì)胞α-SMA的mRNA及蛋白含量較Control組均明顯降低;增加外源

8、性PAI-1后，Rosiglitazone+PAI-1組的α-SMA的mRNA及蛋白含量較Rosiglitazone組明顯增加(P＜0.05)。
　　 4、Rosiglitazone組肺成纖維細(xì)胞Ⅰ型、Ⅲ型膠原的mRNA含量較Control組均明顯降低;增加外源性PAI-1后Rosiglitazone+PAI-1組的Ⅰ型、Ⅲ型膠原的mRNA含量較Rosiglitazone組明顯增加(P＜0.05)。
　　 5、Contr

9、ol組、Rosiglitazone組、Rosiglitazone+PAI-1組的AKT、P-AKT的含量無明顯改變(P＞0.05);Rosiglitazone組肺成纖維細(xì)胞ERK、P-ERK的蛋白含量較Control組均明顯下調(diào)（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1、羅格列酮能抑制大鼠胚肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化及膠原的合成。
　　 2、羅格列酮可以抑制大鼠胚肺成纖維細(xì)胞PAI-1的表達(dá)，從而使纖溶活性