加味補(bǔ)陽(yáng)還五湯防治兔髂動(dòng)脈球囊損傷后狹窄的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、自1977年Gruentzig開(kāi)展第1例經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動(dòng)脈成形術(shù)(Percutaneous Tran-sIuminal Coronapy Angioplasty，PTcA)以來(lái)，PTCA已作為有效治療冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的一種方法廣泛應(yīng)用于臨床，成為心血管病介入治療的豐要手段之一。但此后20余年間PTCA后冠狀動(dòng)脈甲．期再狹窄(Restenosis，RS)的發(fā)生率據(jù)報(bào)道可高達(dá)30﹪～50﹪，一直是網(wǎng)擾醫(yī)學(xué)界的一大難題，也是近年來(lái)臨床和

2、基礎(chǔ)研究的熱點(diǎn)。 RS的確切發(fā)病機(jī)制至今仍未完全明了，目前認(rèn)為可能與血管內(nèi)膜增殖、血管重塑和彈性回縮有關(guān)，另外，局部的炎性免疫反應(yīng)、感染和血管外膜纖維化等因素也起著一定的作用，還有其它如細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、血管和血細(xì)胞成分相互作用等多種因素參與。從實(shí)質(zhì)上說(shuō)，RS是局部血管損傷后的一種修復(fù)反應(yīng)。 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β 1(Transforming growth factor-β，TGF-β)是血管平滑肌細(xì)胞(Vascular

3、smooth mUscle cell，VSMC)增殖、遷移和凋亡的有力調(diào)節(jié)因子，能促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellularmatrix，ECM)分泌以及外膜成纖維細(xì)胞增殖、遷移和表型轉(zhuǎn)化，參與血管損傷后內(nèi)膜增殖和血管重塑，在PTCA后RS病理過(guò)程中起到重要作用。 一氧化氮(N0)是L-精氨酸(L-mg)經(jīng)NO合酶(NOS)作用產(chǎn)生的血管舒張因子，內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表達(dá)及NO的釋放，能抑制vSMC的遷移、增殖并促其

4、凋亡，在多個(gè)環(huán)節(jié)抑制Rs的形成。 氧化應(yīng)激作為炎癥免疫反應(yīng)的顯著標(biāo)志與動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，As)及PTCA后RS的發(fā)生關(guān)系密切，抗氧化損傷可抑制RS的發(fā)生。 如何減少PTCA后RS的發(fā)生一直是研究的熱點(diǎn)。迄今大約有50多個(gè)精心設(shè)計(jì)的臨床試驗(yàn)分別應(yīng)用抗血栓、抗炎癥、抗VSMC遷移增殖及調(diào)脂等藥物持續(xù)8～10年的觀察結(jié)果并沒(méi)有肯定證明它們有明顯降低Rs發(fā)生率的作用。冠脈內(nèi)支架植入術(shù)在一定程度可降低R

5、S發(fā)生率，但術(shù)后RS仍然高達(dá)20﹪-30﹪。藥物洗脫支架(DES)預(yù)防RS是近年來(lái)研究比較熱門(mén)的課題，臨床觀察發(fā)現(xiàn)DES后RS的發(fā)生率明顯降低，小于10﹪，但是有遲發(fā)性支架內(nèi)血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)，而且死亡率高?；蛑委熆赏蔀橹委烺S的手段之一，但目前尚處于試驗(yàn)階段，還有許多理論、技術(shù)、倫理等方面的問(wèn)題要攻克。因此尋找一種能有效防治PTCA后RS的藥物是目前冠脈介入治療的當(dāng)務(wù)之急。 補(bǔ)陽(yáng)還五湯(Buyang Huanwu Decoct

6、ion，BHD)出自清代名醫(yī)王清任的《醫(yī)林改錯(cuò)》，由黃芪、當(dāng)歸、川芎、赤芍、桃仁、紅花、地龍七味藥組成?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí)BHD具有抗氧化應(yīng)激、抗血小板、保護(hù)和修復(fù)血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)功能、改善冠脈循環(huán)、抗實(shí)驗(yàn)性As及抗PTCA后RS等多種作用，加味BHD系原方基礎(chǔ)上加生山楂，三七而成，在保持原有療效同時(shí)，更具有降脂、抑制VSMC增殖等功效，因此，我們推測(cè)加味BHD在防治PTCA后RS方面起著重要作用。 研究目的： 迄今

7、，圍外尚無(wú)有關(guān)BHD防治PTCA后RS的報(bào)道，在謝氏及侯氏的研究中，他們建立的是胸、腹主動(dòng)脈RS模型，主要從影響血小板衍化生長(zhǎng)因子受體(Platelet-derived growth factor receptor，PDGFR)基因和超氧化物歧化酶(SOD-1)基因表達(dá)方面探討藥物作用機(jī)制。本研究通過(guò)建立髂動(dòng)脈內(nèi)膜損傷模型，觀察加昧BHD對(duì)球囊損傷后動(dòng)脈內(nèi)膜的保護(hù)和修復(fù)作用，以及對(duì)TGF-β 1、NO系統(tǒng)和氧化應(yīng)激的影響，探討加味BHD

8、對(duì)兔髂動(dòng)脈球囊損傷后狹窄的防治作用及其可能機(jī)制，為加味BHD用于臨床防治PTCA后RS提供新的實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。 材料與方法： 雄性新西蘭大白兔24只，兔齡4個(gè)月，體重2.0～2.5kg，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組及藥物組，每組各8只。假手術(shù)組兔予普通飼料，模型組、藥物組兔予以高脂喂飼(膽固醇1.0﹪，豬油10﹪，余為普通飼料)。飼養(yǎng)2周后模型組、藥物組兔行髂動(dòng)脈內(nèi)膜剝脫術(shù)，假手術(shù)組兔行假手術(shù)。術(shù)后模型組及藥物組繼續(xù)給予高脂

9、喂飼，藥物組同時(shí)加加味BHD，術(shù)后四周處死各組實(shí)驗(yàn)兔，留取血清檢測(cè)血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、SOD、丙二醛(MDA)、TGF-β1、NO、NOS水平；剪取球囊損傷側(cè)髂動(dòng)脈，經(jīng)中性甲醛固定后分別行HE染色觀察血管內(nèi)膜增生情況，通過(guò)免疫組化檢查觀察TGFβ-1和eNOS蛋白在血管壁的表達(dá)，圖像分析儀分析染色結(jié)果；留取部分髂動(dòng)脈通過(guò)透射電鏡觀察髂動(dòng)脈的超微結(jié)構(gòu)的

10、變化，掃描電鏡觀察EC排列和結(jié)構(gòu)；留取部分髂動(dòng)脈采用RT-PCR方法檢測(cè)血管壁TGF-β1和eNOS mRNA的表達(dá)。所有計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，多組均數(shù)比較采用單因素方差分析，再行組問(wèn)Student-Newman-Keuls檢驗(yàn)多重比較。P<0.05表示差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果： 假手術(shù)組兔于喂養(yǎng)兩周時(shí)自然死亡1只，模型組兔于術(shù)后第10天死亡1只，藥

11、物組兔于術(shù)后第4天死亡1只。所以，每組各有7只動(dòng)物進(jìn)行到實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)。 1、加味BHD對(duì)兔髂動(dòng)脈形態(tài)學(xué)的影響： 光鏡發(fā)現(xiàn)假手術(shù)組兔髂動(dòng)脈管壁光滑，管腔和管壁厚度正常；模型組管壁和內(nèi)膜明顯增厚、管腔明顯狹窄，可見(jiàn)巨大動(dòng)脈硬化斑塊；而藥物組管壁及內(nèi)膜增厚較輕，管腔狹窄較輕。圖象分析結(jié)果示模型組兔髂動(dòng)脈內(nèi)膜面積明顯大于藥物組和假手術(shù)組(P<0.05)，而管腔面積明顯小于藥物組和假手術(shù)組(P<0.05)。 掃描電鏡結(jié)果發(fā)現(xiàn)假

12、手術(shù)組兔髂動(dòng)脈內(nèi)膜的EC形態(tài)正常，排列規(guī)整；而模型組兔髂動(dòng)脈可見(jiàn)多處EC脫落，EC增生參次不齊，內(nèi)皮下膠原纖維暴露：藥物組EC排列則基本正常； 透射電鏡發(fā)現(xiàn)假手術(shù)組兔髂動(dòng)脈血管壁結(jié)構(gòu)層次清晰，內(nèi)皮完整，無(wú)泡沫細(xì)胞；模型組可見(jiàn)EC脫落，大量泡沫細(xì)胞及合成表型的VSMC游走；藥物組EC則基本正常，泡沫細(xì)胞和VSMC較少； 2、加味BHD對(duì)兔血清脂質(zhì)的影響： 藥物組兔血清TC、TG和LDL-C明顯高于假手術(shù)組，但是低于

13、模型組，而且HDL-C明顯高于假于術(shù)組和模型組，以上結(jié)果差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 3、加味BHD對(duì)兔血清SOD活性和MDA水平的影響： 假手術(shù)組兔血清SOD活性明顯高于模型組和藥物組，藥物組SOD活性又明顯高于模型組(P<0.05)，假手術(shù)組兔血清MDA水平明顯低于藥物組和模型組，藥物組MDA水平又明顯低于模型組(P<0.05)。 4、加味BHD對(duì)兔TGF-β1的影響： 假手術(shù)兔血清TGF-

14、β1含量明顯低于模型組和藥物組，藥物組又明顯低于模型組(P<0.05)。免疫組化結(jié)果顯示假手術(shù)組兔髂動(dòng)脈內(nèi)膜TGF-β1的表達(dá)微弱，模型組TGF β-1的染色面積明顯大于假手術(shù)組和藥物組(P<0.05)及TGF-β1的染色灰度均明顯大于假手術(shù)組和藥物組(P<0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示假手術(shù)組兔髂動(dòng)脈儀有少量TGF-β1 mRNA表達(dá)，而模型組TGF-β1 mRNA表達(dá)明顯增加，藥物組TGF-β1 mRNA表達(dá)較模型組則明顯減少(P

15、<0.05)。 5、加味BHD對(duì)兔NO系統(tǒng)的影響： 模型組兔血清NO水平和總NOS活性均明顯低于假手術(shù)組和藥物組(P<0.05)，而后兩者之間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；免疫組化結(jié)果顯示各組動(dòng)物內(nèi)膜均有eNOS蛋白表達(dá)，模型組和藥物組eNOS蛋白表達(dá)較假手術(shù)組明顯減弱(P<0.05)，而藥物組eNOS蛋白表達(dá)較模型組明顯增強(qiáng)(P<0.05)；RT-PCR結(jié)果顯示各組動(dòng)物內(nèi)膜內(nèi)均有eNOS mRNA表達(dá)，模型組和藥物

16、組eNOS mRNA表達(dá)較假手術(shù)組明顯減弱(P<0.05)，而藥物組較模型組明顯增強(qiáng)(P<0.05)。 結(jié)論： 1.加味BHD可減輕兔髂動(dòng)脈球囊損傷后的內(nèi)膜增生和管腔狹窄。 2.加味BHD對(duì)高脂喂飼兔具有抗實(shí)驗(yàn)性As作用。 3.加味BHD可降低髂動(dòng)脈球囊損傷后兔的血清TC、TG、LDL-C含量及升高血清HDL-C的水平，具有調(diào)節(jié)血脂的作用。 4.加味BHD可降低髂動(dòng)脈球囊損傷后兔血清MDA的水平及