硫酸鎳對大鼠睪丸細(xì)胞周期和增殖細(xì)胞核抗原（PCAN）表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：通過觀察硫酸鎳(NiSO<,4>)致大鼠睪丸細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)、線粒體和微粒體氧化應(yīng)激效應(yīng)、細(xì)胞周期以及增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)表達水平的變化，初步探討其毒作用及其機制。 方法：選擇健康性成熟wistar雄性大鼠，隨機分為4組：正常對照組(NS組)，硫酸鎳(NiSO<,4>)1.25mg/kg(1/16LD<,50>)、2.50mg/kg(1/8LD<,50>)、5.00mg/kg(1/4LD<,50>)組。腹腔注射染毒，1次

2、/d，連續(xù)30天。采用透射電鏡觀察染毒大鼠睪丸細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測染毒大鼠睪丸組織中各倍體細(xì)胞所占的百分比、各倍體細(xì)胞的比率以及細(xì)胞周期的變化；原位雜交技術(shù)檢測生精上皮周期中生精細(xì)胞增殖細(xì)胞核抗原(PcNAmRNA)的表達水平；分光光度法檢測睪丸細(xì)胞線粒體和微粒體中脂質(zhì)過氧化物(LPO)的含量和總抗氧化能力(T-AOC)、抗-活性氧(anti-ROS)的活性。 結(jié)果：(1)透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，染毒組大鼠各類睪丸

3、組織細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的超微結(jié)構(gòu)改變，包括基底膜腫脹增厚、斷裂；精原、精母及圓形精子細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)空泡、溶酶體數(shù)量增加，線粒體水腫擴張、脊模糊甚至消失，核質(zhì)間隙增寬，個別細(xì)胞可見染色質(zhì)散開、核內(nèi)容物消失、核膜凹陷、邊集、核固縮等細(xì)胞死亡的特征；變形期精子細(xì)胞橫斷面可見空泡，線粒體腫張。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，NiSO<,4>5.00mg/kg組挈丸組織二倍體和S期細(xì)胞數(shù)減少(P<0.05)。各倍體細(xì)胞比率的分析發(fā)現(xiàn)，NiSO<,4>2.

4、50mg/kg、5.00mg/kg組1C∶2C、4C∶2C和4C∶S比值升高(P<0.05)。細(xì)胞周期的檢測結(jié)果顯示，NiSO<,4>2.50mg/kg、5.00mg/kg組G<,0>/G<,1>期細(xì)胞數(shù)減少(P<0.05)，G<,2>/M期細(xì)胞數(shù)增加(P<0.05)；NiSO<,4>5.00mg/kg組S期細(xì)胞數(shù)減少(P<0.05)。(3)原位雜交檢測發(fā)現(xiàn)，硫酸鎳(NiSO<,1>)2.50mg/kg、5.00mg/kg組生精上皮周期

5、Ⅰ～Ⅵ期、Ⅻ～ⅩⅢ期的精原、精母細(xì)胞PCNAmRNA陽性表達細(xì)胞數(shù)減少(P<0.05)；(4) 與對照組比較，NiSO<,4>2.50、5.00mg/kg組睪丸組縱細(xì)胞線粒體及微粒體中LPO含量升高、anti-ROS活性降低(P<0.05)，各染毒組T-AOC均低于對照組(P<0.01)。 結(jié)論：硫酸鎳可引起大鼠睪丸組織細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)和細(xì)胞周期的改變，其機制可能與硫酸鎳所致的睪丸生精細(xì)胞中PCNAmRNA表達水平降低以及線粒體、微