基于Th17-Treg細胞失衡研究補腎清毒法治療CHB的作用機制.pdf

1、研究目的:
　　中醫(yī)藥治療慢性乙型病毒性肝炎(Chronic Viral Hepatitis B，CHB)有獨特優(yōu)勢，通過觀察補腎清毒法治療CHB的臨床療效和檢測其對Th17/Treg及相關因子表達的影響，探討補腎清毒法治療CHB的臨床優(yōu)勢以及對Th17/Treg細胞免疫平衡的影響，探討HBV免疫耐受的途徑、補腎清毒法抗HBV可能的作用靶點和機制，部分闡明補腎清毒法治療CHB的免疫活化機制，為補腎清毒法治療CHB提供部分科學依據(jù)。

2、
　　研究方法:
　　1.收集CHB患者，隨機分為西藥組和中西藥組，另設健康獻血者為對照組。西藥治療組予核苷酸類似物治療，中西藥組治療組在核苷酸類似物基礎上加用補腎清毒法，建立患者病歷檔案。
　　2.補腎清毒法臨床療效的觀察:記錄入組時、治療3個月、治療6個月后臨床證候積分，并按以上時間點于我院門診抽取外周靜脈血，采用肝臟生化自動分析儀檢測肝功能(ALT、AST)、實時熒光定量PCR儀檢測HBV-DNA定量。分析西藥組

3、和中西藥組臨床證候、HBV-DNA定量、肝功能(ALT、AST)治療前后的變化。
　　3.補腎清毒法對Th17/Treg細胞及其相關因子(IL10、IL-17、TGF-β)的影響:經(jīng)簽署知情同意書后，正常組、中西藥組、西藥組分別于入組時和治療6個月后抽取外周靜脈血20ml，用密度梯度離心法分離得到外周血單個核細胞(PBMC)，并凍存于-80度冰箱。細胞復蘇培養(yǎng)及刺激培養(yǎng)后，采用流式抗體細胞膜和胞內染色技術檢測CHB患者外周血Tre

4、g和Th17表達頻率，并檢測其相關細胞因子TGF-β、IL10、IL-17。分析健康人群與CHB患者，西藥組與中西藥組治療前后外周血Th17、Treg細胞表達頻率及其表達或相關因子（IL-17、IL-10、TGF-β1）是否有差異。
　　研究結果:
　　1.補腎清毒法臨床療效的觀察:
　　收集36例慢性乙肝患者，隨機分為西藥組19例、中西藥組17例。
　　中西藥組:與入組時比較，治療3個月和治療6個月，臨床證候評

5、分、HBV-DNA、ALT均明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與治療3月比較，治療6個月臨床證候評分、HBV-DNA、ALT均明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　西藥組:與入組時比較，治療3個月和治療6個月，HBV-DNA、ALT顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，治療3個月，臨床證候評分有下降，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，治療6個月，臨床證候評分顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與

6、治療3個月比較，治療6個月后，HBV-DNA、ALT繼續(xù)下降，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），臨床證候評分有下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　與西藥組比較，治療3個月時，中西藥組臨床證候評分明顯減低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);治療6個月時，中西藥組臨床證候評分和HBV-DNA顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2.補腎清毒法對Th17/Treg細胞及其相關因子（IL-17、IL-10、TG

7、F-β1）的影響
　　Treg細胞:治療前，與正常組相比，中西藥組和西藥組Treg表達頻率明顯上升，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與治療前相比，中西藥組和西藥組治療后Treg表達頻率明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，中西藥組與西藥組相比較，Treg表達頻率明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，中西藥組和正常組表達頻率相近，差異無統(tǒng)計意義（P＞0.05），西藥組Treg表達頻率仍高于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜

8、0.05)。
　　IL-17:治療前，與正常組相比，中西藥組和西藥組IL-17表達頻率明顯上升，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;治療后，中西藥組和西藥組IL-17表達頻率明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但與正常組相比仍較高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與西藥組相比較，中西藥組IL-17表達頻率較低，但差異無統(tǒng)計意義(P＞0.05)。
　　IL-10:治療前，與正常組相比，中西藥組和西藥組IL-10表達頻率

9、明顯上升，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);治療后，中西藥組和西藥組表達頻率較治療前比較顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但其與正常組相比，IL-10表達頻率仍較高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且中西藥組和西藥組相近，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　TGF-β:治療前，與正常組相比，中西藥組和西藥組TGF-β表達頻率明顯上升，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);治療后，中西藥組和西藥組表達頻率較治療前下降，差

10、異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但其與正常組相比，TGF-β表達頻率仍較高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與西藥組相比，中西藥組TGF-β表達頻率較高，差異無統(tǒng)計學意義。
　　研究結論:
　　1.補腎清毒法聯(lián)合核苷酸藥物能較快降低中醫(yī)臨床證候評分，改善患者臨床不適癥狀，而且隨著補腎清毒方的持續(xù)運用，其臨床證候進一步改善。
　　2.補腎清毒法聯(lián)合核苷酸藥物使用能持續(xù)且穩(wěn)定地降低HBV-DNA、轉氨酶(ALT)，效果優(yōu)