腦膠質(zhì)瘤中OPN、MMP-9和MVD的表達及意義.pdf

1、目的：腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)常見的惡性腫瘤，其侵襲性強，術(shù)后復發(fā)快，是神經(jīng)外科最棘手的難治性腫瘤之一，目前為止臨床治療效果仍不盡人意。治療上的差異無疑是其重要的影響因素，但腫瘤內(nèi)在的生物學特性，特別是分子水平的差異才應該是關(guān)鍵所在。
　　 近年來，通過對人腦膠質(zhì)瘤分子遺傳學的研究，人們已認識到腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個復雜的多步驟連續(xù)過程，涉及到粘附分子、酶類、細胞因子、基因調(diào)控、細胞周期進展改變、信號傳導途徑異常等多方面的因素。近年的

2、研究證實，骨橋蛋白（osteopontin，OPN）是一種具有多種功能的細胞基質(zhì)蛋白，有助于多種腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移，是一種新的腫瘤標記物。基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）是降解細胞外基質(zhì)（extracelluar matrix，ECM）的重要蛋白水解酶，ECM的降解一方面引起細胞外基質(zhì)這種屏障的破壞，使瘤細胞更容易向周圍組織侵襲，另一方面，有利于腫瘤內(nèi)新生血管的形成，故MMP-9

3、在膠質(zhì)瘤的侵襲過程中起著非常重要的作用。
　　 因此通過檢測OPN和MMP-9在正常腦組織、低級別和高級別膠質(zhì)瘤中的表達，探討OPN和MMP-9在人腦膠質(zhì)細胞瘤中的表達及其臨床意義，并同時檢測微血管密度（MVD）的表達情況了解前兩個指標是否在促進腫瘤血管增殖方面起到一定作用。
　　 方法：收集河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院神經(jīng)外科2007年2月-2008年5月手術(shù)治療的50例膠質(zhì)瘤病人（其中男性31例，女性19例）的手術(shù)標本，年齡

4、10-74歲，平均年齡46.66±16.85歲。按WHO（2000年）神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標準明確病理診斷（分類和分級），其中Ⅰ級8例，Ⅱ級16例，Ⅲ級16例，Ⅳ級10例。另取因腦皮質(zhì)造瘺的正常腦組織8例作為對照。所有標本均經(jīng)4％多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。制成5微米切片以備免疫組化染色。
　　 免疫組化結(jié)果判定：每張切片在陽性表達較高區(qū)隨機選擇5個高倍鏡視野（×400），連續(xù)計數(shù)至少1000個腫瘤細胞。首先將染色強度分級打分：0分

5、為無色陰性，1分為淡黃色弱陽性，2分為棕黃色中等陽性，3分為棕褐色強陽性。（染色深淺與背景著色相對比）。再將陽性細胞所占的百分比打分：0分為陰性，1分為陽性細胞≤10％，2分為11％-50％，3分為51％-75％，4分為>75％。染色強度與陽性細胞百分比的乘積>3分才算免疫反應陽性。
　　 計數(shù)微血管密度的方法：瘤組織內(nèi)陽性著色的單個內(nèi)皮細胞或內(nèi)皮細胞簇計為1個陽性血管標記，每例觀察切片1張，避開腫瘤壞死或出血區(qū)域，在低倍鏡（×

6、40）下選擇微血管最豐富區(qū)，即“熱點”（“hot spot”），在高倍視野（×200）下計數(shù)，計數(shù)5個200倍視野下的血管數(shù)，其算術(shù)平均數(shù)計為該例切片的MVD測定值。不同組別膠質(zhì)瘤的MVD用X±S表示。
　　 統(tǒng)計學方法：根據(jù)數(shù)據(jù)采集的不同方法及統(tǒng)計學處理的不同要求，選用單因素方差分析，x2檢驗，t檢驗，t'檢驗和Spearman等級相關(guān)分析統(tǒng)計學方法。使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理。P<0.05有統(tǒng)計學意義。
　　

7、結(jié)果：實驗結(jié)果顯示OPN與MMP-9在50N腦膠質(zhì)瘤中表達陽性率分別為72.0％，66.0％，在正常腦組織中表達陽性率分別為12.5％，0.0％。MVD在膠質(zhì)瘤組和正常腦組織中的表達均值分別為36.71±16.79、3.91±0.60。OPN、MMP-9、MVD在腫瘤組和正常腦組織組之間的差異顯著且均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。OPN、MMP-9在高級別腫瘤組（Ⅲ、Ⅳ級）中表達陽性率分別為88.5％，84.6％，OPN、MMP-9在低

8、級別腫瘤組（Ⅰ、Ⅱ級）中表達陽性率分別為54.2％，45.8％，MVD在高級別腫瘤組（Ⅲ、Ⅳ級）和低級別腫瘤組（Ⅰ、Ⅱ級）中的表達均值分別為50.53±7.82，21.73±9.18，OPN、MMP-9、MVD在高級別腫瘤組（Ⅲ、Ⅳ級）和低級別腫瘤組（Ⅰ、Ⅱ級）之間的差異顯著且均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。OPN、MMP-9表達陽性腫瘤組的MVD值分別為42.82±14.07，44.19±12.74，表達陰性腫瘤組的MVD值分別為20

9、.98±12.65，22.18±14.10，兩者MVD差異顯著（P<0.01）。在低級別組中，同時陽性表達OPN、MMP-9的MVD值為33.14±2.19，OPN、MMP-9只有一個陽性表達的MVD值為15.62±0.84，OPN、MMP-9都陰性表達的MVD值為14.41±1.55，前者與后兩者相比差異有顯著性（P<0.01），后兩者之間相比差異不顯著無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。OPN與MMP-9表達呈正相關(guān)（r=0.82，P<0

10、.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1、膠質(zhì)瘤中OPN、MMP-9、MVD的表達顯著高于正常腦組織。OPN、MMP-9、MVD在高級別腫瘤組的表達明顯高于低級別組。
　　 2、OPN與MVD的表達關(guān)系密切，MMP-9與MVD的表達關(guān)系密切。在低級別組中，同時陽性表達OPN、MMP-9的MVD值顯著高于只有一個陽性表達和都陰性表達的MVD值，提示OPN與MMP-9在膠質(zhì)瘤的新生血管的產(chǎn)生中起重要作用，并可能有協(xié)同作用。