氯沙坦對(duì)IgA腎病大鼠腎組織p38的影響.pdf

1、目的：IgA腎?。↖gA nephropathy，IgAN）是目前世界上最常見(jiàn)的慢性進(jìn)行性的原發(fā)性腎小球疾病。其主要病理特征是IgA免疫復(fù)合物在系膜區(qū)沉積，導(dǎo)致系膜細(xì)胞的增殖和細(xì)胞外基質(zhì)的沉積，引起一系列臨床及病理生理改變，是導(dǎo)致終末期腎?。‥SRD）的主要原因之一。隨著腎臟活組織穿刺技術(shù)的逐漸推廣，兒童IgA腎病的診斷率也在逐年提高，但目前尚無(wú)特效的治療方法，臨床仍以控制癥狀及經(jīng)驗(yàn)性治療為主。以往認(rèn)為IgA腎病是一種良性疾病，預(yù)后好。

2、但長(zhǎng)期隨訪結(jié)果發(fā)現(xiàn)約20％～50％的成人患者最終發(fā)展至腎功能衰竭[1]。兒童患者預(yù)后較成人好，但起病5年、10年、15年后分別有5％、6％及11％的患兒產(chǎn)生慢性腎功能衰竭。因此如何積極防治IgA腎病在我國(guó)腎臟病研究中具有舉足輕重的地位。大量的研究表明腎素-血管緊張素系統(tǒng)（Renin-AngiotensinSystem，RAS），尤其是血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，ATⅡ），是慢性腎臟疾病進(jìn)行性發(fā)展的重要影響因素。RAS在IgA

3、腎病的發(fā)病中也有重要作用。應(yīng)用RAS阻滯劑可有效改善IgA腎病的臨床癥狀，血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（AngiotensinⅡ receptor blockers，ARB）是腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）抑制劑，近年來(lái)被有效地用于IgA腎病的治療。氯沙坦是特異性血管緊張素ⅡⅠ型受體拮抗劑，對(duì)于IgA腎病患者，尤其是合并蛋白尿或高血壓的患者，氯沙坦有利于保護(hù)腎功能延緩腎衰竭的發(fā)生。研究表明，p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可被血管緊張素Ⅱ等炎性因子

4、激活，在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用而且通過(guò)多種途徑促進(jìn)腎臟纖維化。而血管緊張素ⅡⅠ型受體拮抗劑的腎臟保護(hù)作用是否通過(guò)阻斷p38MAPK轉(zhuǎn)導(dǎo)通路改善腎臟纖維化、延緩腎小球硬化的進(jìn)程目前尚無(wú)明確定論。我們以IgA腎病大鼠為模型，觀察氯沙坦對(duì)IgA腎病大鼠腎臟組織中p38MAPK表達(dá)情況的影響，初步探討血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑的腎臟保護(hù)作用機(jī)制及治療IgA腎病的作用機(jī)制。
　　 方法：Wistar雄性大鼠，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供

5、（試驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證編號(hào)：702022）。按湯穎等建立的方法，選取體重100～120g雄性Wistar大鼠30只按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分成對(duì)照組（n=10）；IgA腎病組（n=10）；氯沙坦（losartan，杭州默沙東制藥公司提供）組（n=10）。IgA腎病組和氯沙坦組大鼠以牛血清白蛋白400mg·kg-1·d-1隔天灌胃，持續(xù)6周；皮下注射蓖麻油0.5mL+四氯化碳0.1mL，每周1次，持續(xù)9周；分別于第6、8周以脂多糖0.05mg尾靜脈

6、注射，直至10周末。實(shí)驗(yàn)期間對(duì)照組動(dòng)物自由進(jìn)食飲水，不給予任何藥物干預(yù)。建模后將IgA腎病組大鼠腎皮質(zhì)組織切成3gm的冰凍切片，采用兔抗大鼠IgA和FITC標(biāo)記羊抗兔IgG間接免疫熒光染色，熒光顯微鏡下觀察到腎小球系膜區(qū)IgA沉積陽(yáng)性，PAS和Masson染色顯示系膜細(xì)胞增生和系膜基質(zhì)的沉積表明造模成功。模型建成后，氯沙坦組大鼠給予氯沙坦20mg-kg-1·d-1灌胃四周，對(duì)照組給予等量蒸餾水灌胃四周，總實(shí)驗(yàn)周期為14周。各組大鼠處死前

7、用代謝籠收集大鼠24小時(shí)尿液，測(cè)定24小時(shí)尿蛋白。股動(dòng)脈放血分離血清測(cè)定腎功能。取部分腎組織置于4％多聚甲醛固定用于光鏡觀察及免疫組化檢測(cè)；部分腎皮質(zhì)組織用于提取腎組織總RNA和腎組織總蛋白。免疫組化檢測(cè)腎皮質(zhì)磷酸化p38蛋白激酶（p-p38MAPK）的表達(dá)特征。Western Blot檢測(cè)腎臟磷酸化和非磷酸化p38MAPK的表達(dá)水平。RT-PCR檢測(cè)大鼠腎組織中p38MAPK的mRNA含量。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，用

8、SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。組間差異用單因素方差分析（one way-ANOVA），有顯著差異者用Newman-Kuels q檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.生化指標(biāo)顯示，IgA腎病組大鼠24小時(shí)尿蛋白（24hUpro）、血尿素氮（BUN）和血肌酐（SCr）明顯高于對(duì)照組（P<0.01），血白蛋白明顯低于對(duì)照組（P<0.01）；氯沙坦組與IgA腎病組相比各指標(biāo)均有不同程度改

9、善（P<0.05）。
　　 2.免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示，p-p38MAPK在對(duì)照組大鼠腎組織中有微弱表達(dá)，而在IgA腎病組的相對(duì)含量顯著增加，與對(duì)照組相比有顯著性差異（P<0.01）；氯沙坦組蛋白表達(dá)較IgA腎病組降低，有顯著性差異（P<0.01）。
　　 3.Western印跡結(jié)果顯示，p38MAPK蛋白在IgA腎病組和對(duì)照組的表達(dá)無(wú)明顯差異（P>0.05）。與對(duì)照組相比，IgA腎病組大鼠腎組織中p-p38MAPK的表達(dá)

10、水平明顯升高（P<0.01）；氯沙坦組大鼠p-p38MAPK的蛋白表達(dá)較IgA腎病組明顯降低（P<0.01）。
　　 4.RT-PCR結(jié)果顯示，p38MAPK mRNA在對(duì)照組大鼠腎組織中有少量表達(dá)，IgA腎病組大鼠腎組織該蛋白表達(dá)明顯上調(diào)（P<0.01）；氯沙坦組大鼠p38MAPK mRNA表達(dá)顯著下調(diào)（P<0.01）。
　　 結(jié)論
　　 1.氯沙坦能有效的降低IgA腎病大鼠的24小時(shí)尿蛋白，并對(duì)IgA腎病大鼠

11、腎功能改善有一定的作用。
　　 2.在IgA腎病大鼠腎組織內(nèi)p38MAPK被激活，p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活在IgA腎病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能發(fā)揮著重要的作用。
　　 3.氯沙坦能夠明顯抑制IgA腎病大鼠腎組織p38MAPK信號(hào)蛋白的表達(dá)。
　　 4.氯沙坦的腎臟保護(hù)作用可能是通過(guò)抑制p38MAPK的表達(dá)改善腎臟纖維化、延緩腎小球硬化來(lái)完成的。
　　 5.p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑可能成為臨床治