益骨湯含藥血清對(duì)骨細(xì)胞因子OPG、RANKLmRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究中藥復(fù)方益骨湯含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞骨細(xì)胞因子OPG、RANKLmRNA的基因表達(dá)，以探討中藥復(fù)方防治骨質(zhì)疏松癥的作用機(jī)理。
　　方法：1.采用胰酶-膠原酶消化法從新生SD小鼠顱骨獲取成骨細(xì)胞，進(jìn)行原代、傳代培養(yǎng)。取第二代細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。同時(shí)制備各種含藥血清。
　　2.將不同濃度的益骨湯含藥血清以及含福善美陽性對(duì)照組血清和空白對(duì)照組血清與分離培養(yǎng)制得的新生大鼠顱骨第二代成骨細(xì)胞共同培養(yǎng)。
　　3.細(xì)

2、胞形態(tài)學(xué)觀察：每日通過相差顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)、生長狀況及對(duì)照組和中藥血清處理組之間的差別。
　　4.提取成骨細(xì)胞總 RNA。（使用Trizol兩步法）。
　　5.mRNA表達(dá)的定量：用β-actin作為內(nèi)參照，RT-PCR測(cè)定各組成骨細(xì)胞 OPG和RANKL的相對(duì)表達(dá)量，并計(jì)算各組OPG/RANKL的比值。
　　結(jié)果：細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，益骨湯含藥血清高中低各組、福善美陽性對(duì)照組與生理鹽水空白對(duì)照組比較，細(xì)胞數(shù)量較密集，

3、細(xì)胞間隙小，形態(tài)無明顯差異。RT-PCR結(jié)果顯示：在OPG mRNA的表達(dá)方面，高、中、低劑量組、福善美陽性對(duì)照組分別與生理鹽水空白對(duì)照組比較均有顯著性差異（P值分別為P<0.01，P<0.05，P<0.05，P<0.01）；高、中、低劑量組與福善美組比較均無顯著性差異（P＞0.05）；高、中、低三組組間比較，均有顯著性差異（P<0.05）。在RANKL mRNA的表達(dá)方面，高、中、低劑量組、福善美組分別與生理鹽水組比較均有顯著性差異（

4、P值分別為P<0.01，P<0.05，P<0.05，P<0.01）；高、中、低劑量組與福善美組比較均無顯著性差異（P＞0.05）；高、中、低三組組間比較，均有顯著性差異（P<0.05）。在OPG/RANKL比值改變方面，高、中、低劑量組、福善美組分別與生理鹽水組比較均有顯著性差異（P值分別為P<0.01，P<0.05，P<0.05，P<0.01）；高、中、低劑量組與福善美組比較均無顯著性差異（P＞0.05）；高、中、低三組組間比較，均有