突觸自身穩(wěn)態(tài)可塑性在大鼠視覺發(fā)育及異常視覺經(jīng)驗中的作用研究.pdf

1、目的：通過離體腦片膜片鉗方法記錄的視覺發(fā)育關鍵期前、關鍵期內(nèi)以及單眼形覺剝奪大鼠初級視皮層II/III層錐體神經(jīng)元的微小興奮性突觸后電流(mEPSCs)參數(shù)的分析，研究突觸自身穩(wěn)態(tài)可塑性在正常視覺發(fā)育及異常視覺環(huán)境下的作用機制，觀察天然藥物A對單眼形覺剝奪大鼠突觸自身穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)的影響。 方法：1.正常視覺發(fā)育大鼠mEPSCs測定：生后4-21天Wistar大鼠分為三組：1周齡(P4-11)、2周齡(P12-16)及3周齡(P17-

2、21)。制作400μm厚度視皮層的離體腦片，全細胞模式膜片鉗記錄初級視皮層II/III層錐體神經(jīng)元的mEPSCs。Clampfit9.0和SPSSforWindows11.5分別對mEPSCs波幅、頻率、上升時間常數(shù)、下降時間常數(shù)及輸入阻抗等各項參數(shù)進行分析及統(tǒng)計學處理；2.單眼形覺剝奪及逆轉縫合大鼠mEPSCs測定：制作單眼形覺剝奪模型，分別測定剝奪后1-7天初級視皮層II/III層錐體神經(jīng)元mEPSCs，分析各項電流參數(shù)；單眼剝奪4

3、8h后逆轉縫合48h，進行mEPSCs測定及統(tǒng)計學分析。3.離體腦片灌流天然藥物A，測定II/III層錐體神經(jīng)元mEPSCs，并設立相應天數(shù)的正常對照組。 結果：1.正常視覺發(fā)育大鼠mEPSCs：第1周隨年齡增加，波幅逐漸上升；P4及P6的頻率較低，P7至P11期間呈現(xiàn)一定上升趨勢，上升與下降時間常數(shù)隨年齡增加而縮短，后者變化顯著。本實驗首次觀察到在P4-6出現(xiàn)“單通道樣”興奮性電流形態(tài)，P7呈現(xiàn)過渡型波形，隨后波形趨于正常。生

4、后2周波幅降低，頻率增加；生后3周波幅、頻率、上升時間常數(shù)、下降時間常數(shù)均無顯著變化，但波幅累積分布具有統(tǒng)計學差異。各實驗組輸入阻抗無顯著差異。2.單眼形覺剝奪大鼠mEPSCs：剝奪側mEPSCs波幅較對照側顯著增加，頻率降低，下降時間常數(shù)不同程度延長；形覺剝奪2d時，剝奪側mEPSCs波幅、頻率、下降時間常數(shù)變化最顯著；剝奪側與對照側波幅均較相應天數(shù)的正常組增加、頻率降低、下降時間常數(shù)明顯延長；逆轉縫合48h后，原剝奪側波幅下降、頻率

5、增加、下降時間常數(shù)縮短，與相應日齡正常發(fā)育大鼠存在顯著性差異；與原對照側相比，逆轉縫合側mEPSCs波幅增加，頻率降低，上升時間常數(shù)及下降時間常數(shù)增加。3.天然藥物A作用后mEPSCs：單眼形覺剝奪1d-7d大鼠視皮層腦片在天然藥物A作用后均出現(xiàn)mEPSCs波幅下降、頻率上升及下降時間常數(shù)縮短，在剝奪3d、4d及7d還可見上升時間常數(shù)輕度縮短；單眼剝奪對照側初級視皮層II/III層錐體神經(jīng)元AMPA介導的mEPSCs在天然藥物A作用后，

6、波幅輕度下降，頻率輕度增加，上升時間常數(shù)、下降時間常數(shù)及輸入阻抗差異均無顯著性；天然藥物A對相應日齡正常發(fā)育大鼠各項參數(shù)均無顯著影響。 結論：1.正常發(fā)育大鼠睜眼前初級視皮層II/III層錐體神經(jīng)元突觸自身穩(wěn)態(tài)可塑性變化不穩(wěn)定，隨著睜眼時間延長，突觸自身穩(wěn)態(tài)可塑性逐漸下調(diào)，于三周后逐漸趨于穩(wěn)定。2.單眼剝奪后剝奪側初級視皮層II/III層錐體神經(jīng)元突觸自身穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)作用顯著上調(diào)，對側視皮層輕度上調(diào)；單眼剝奪2d即可達剝奪效力的峰值