

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、實(shí)驗(yàn)一、大鼠肝星狀細(xì)胞分離與培養(yǎng)方法的改良與體會(huì)
目的:探討一種經(jīng)濟(jì)易行的大鼠肝星狀細(xì)胞的分離與培養(yǎng)方法,為今后從細(xì)胞及分子水平上研究肝纖維化的發(fā)病機(jī)理提供有利條件。
方法:取成年大鼠,用兩步酶液對(duì)其肝臟進(jìn)行離體循環(huán)灌注,經(jīng)兩種密度的Nycodenze密度梯度高速離心(20000r/min)和細(xì)胞懸液低速離心(40× g)去雜質(zhì)后得到原代HSCs。臺(tái)盼蘭拒染實(shí)驗(yàn)鑒定細(xì)胞活率,desmin和GFAP免疫細(xì)胞化學(xué)
2、雙抗單染色法鑒定剛分離的肝星狀細(xì)胞的純度。()-SMA免疫細(xì)胞化學(xué)AEC顯色鑒定培養(yǎng)7天的細(xì)胞活化程度。
結(jié)果:HSCs的得率為(3.6±0.1)×107/肝,HSCs存活率為(92.8±0.8)%,對(duì)培養(yǎng)24小時(shí)的HSCs行desmin和GFAP共同鑒定DAB顯色,細(xì)胞陽性率為(96.2±0.5)%;取培養(yǎng)7天的細(xì)胞爬片做()-SMA做HSCs的活化鑒定AEC顯色,細(xì)胞陽性率為(72.3±0.6)%。
結(jié)論
3、:改良法在保障大鼠原代HSCs產(chǎn)量的前提下提高了細(xì)胞純度,有利于對(duì)原代大鼠HSCs生物學(xué)特性及肝纖維化機(jī)制的進(jìn)一步研究。
實(shí)驗(yàn)二、內(nèi)毒素對(duì)大鼠原代肝星狀細(xì)胞TGF-β1表達(dá)的影響及其機(jī)制的初步研究
目的:觀察內(nèi)毒素刺激大鼠原代HSCs后TGF-β1表達(dá)的影響,探討PDTC(NF-κB抑制劑)改善肝纖維化的機(jī)制。
方法:用鏈酶蛋白酶液和膠原酶液離體灌注消化健康成年大鼠肝臟,Nycodenze密度梯
4、度離心,得到原代HSCs,在含有內(nèi)毒素終濃度分別為0.01、0.1、1、10μg/m1的培養(yǎng)液中培養(yǎng),各濃度組分別在培養(yǎng)第2、4、8天時(shí)收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液,-20℃保存,Elisa法測(cè)定TGF-β1含量。在含有各濃度內(nèi)毒素的培養(yǎng)液中分別在第2、4、8天換成含PDTC終濃度為10μmol/L且含有原濃度內(nèi)毒素的培養(yǎng)液,對(duì)照組在第2、4、8天時(shí)換成只含有原濃度內(nèi)毒素未加PDTC的培養(yǎng)液,48小時(shí)后,收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液-20℃保存,Elisa
5、法測(cè)定TGF-β1含量。
結(jié)果:內(nèi)毒素直接刺激HSCs,分別在第2、4、8天測(cè)得的TGF-β1含量均高于對(duì)照組,且1μg/ml組TGF-β1的表達(dá)升高最多,其次為0.1μg/ml組,10μg/ml組和0.01μg/ml組。加入PDTC后,各組TGF-β1的表達(dá)量均低于對(duì)照組。
結(jié)論:一定濃度的內(nèi)毒素直接作用原代HSCs使其TGF-β1表達(dá)增加,提示內(nèi)毒素可直接引起HSCs的活化,這可能是內(nèi)毒素促進(jìn)肝纖維化的途
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 間歇壓力對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞Ⅰ型膠原和TGF-β1表達(dá)影響的研究.pdf
- 舒肝顆粒對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞α-SMA、TNF-α、TGF-β-,1-表達(dá)的影響.pdf
- 外源性TGF-β3對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞內(nèi)源性TGF-β3表達(dá)及其增殖的影響.pdf
- 大鼠TGF-β3基因的克隆及其對(duì)肝星狀細(xì)胞TGF-β1和I型膠原合成的影響.pdf
- 川芎嗪和siRNA沉默TGF-β1對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞CTGF表達(dá)的影響.pdf
- 異甘草酸鎂對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞TGF-β-smad信號(hào)表達(dá)的影響.pdf
- 外源性TGF-β-,1-對(duì)活化的大鼠肝星狀細(xì)胞內(nèi)Smads蛋白表達(dá)的影響.pdf
- TGF-β1對(duì)肝星狀細(xì)胞的活化作用及機(jī)制.pdf
- 蒙古山蘿卜酸體外對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞TGF-β1和PDGF mRNA表達(dá)的影響.pdf
- TGF-β1對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶表達(dá)的影響.pdf
- CREB-1對(duì)肝星狀細(xì)胞TGF-β3表達(dá)及其啟動(dòng)子活性的影響.pdf
- TGF-β1對(duì)大鼠BMSCs VEGF表達(dá)的影響及其機(jī)制.pdf
- IL--17對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞膠原代謝的影響及其機(jī)制探討.pdf
- TGF-β1抗體對(duì)肝星狀細(xì)胞Ⅰ型膠原及TIMP-1基因表達(dá)的影響.pdf
- 高糖、高胰島素對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖及其TGF-β1、TIMP-1 mRNA表達(dá)的影響.pdf
- 丹參素對(duì)肝星狀細(xì)胞TGF-β1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響.pdf
- 甘草酸對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞TGF-β1-smad信號(hào)通路的影響.pdf
- 靶向COX-2shRNA對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞α-SMA、Ⅰ型膠原、TGF-β1基因表達(dá)的影響.pdf
- 內(nèi)毒素對(duì)肝星狀細(xì)胞表達(dá)結(jié)締組織生長因子的影響.pdf
- 內(nèi)毒素對(duì)大鼠原代肝星狀細(xì)胞及肝纖維化過程中肝臟內(nèi)ERK1-2信號(hào)通路的影響.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論