藍隱藻(Chroomonas placoidea)藻藍蛋白β亞基組成和性質(zhì)研究.pdf

1、以藍隱藻（Chroomonas placoidea T13）為材料，經(jīng)藻體細胞破碎、硫酸銨分級沉淀分離、分子篩層析得到A645/A280大于7的純化的藻藍蛋白645（phycocyanin, PC645）；摸索并優(yōu)化了IEF、SDS-PAGE、二維電泳以及二次SDS-PAGE方法進行亞基分離的條件，得到了純化的PC645亞基；并對其存在爭議的?亞基的種類、組成、光譜性質(zhì)和亞基序列差異進行了研究。
　　分離、純化后的各級硫酸銨飽和度

2、的PC645，表現(xiàn)出近乎相同的光譜性質(zhì)，吸收光譜的最大吸收峰在580和645nm，熒光發(fā)射光譜的最大發(fā)射峰在660-662nm。
　　亞基分離結果顯示，藍隱藻PC645除了?1和?2外，含有兩個不同的β亞基，分別命名為β1和β2，其等電點分別是6.2和5.8，分子質(zhì)量分別為18.6kDa和15.2kDa。純化的?亞基在可見光區(qū)主要產(chǎn)生580nm吸收以及587nm的激發(fā)峰（與DBV色基有關），但630-640nmPCB的吸收不明顯，

3、且660nm的特征發(fā)射峰消失，可能PCB色基存在狀態(tài)發(fā)生了變化。其中β2亞基的含量隨藻藍蛋白疏水性的增強而增加，在70％硫酸銨飽和度下沉淀的PC645含量最高。
　　將經(jīng)過二維電泳或二次SDS-PAGE方法純化的兩種β亞基進行膠內(nèi)酶解，摸索了胰蛋白酶的酶解條件和酶解液的SDS-PAGE肽譜分離條件，以及反向C18色譜柱液相系統(tǒng)分析條件。結果表明：變性后的藍隱藻PC645至少存在4個極性不同的亞基；兩個β亞基的酶解液在極性區(qū)有明顯序