PDLLA-β-TCP-PRGD-NGF復(fù)合材料誘導(dǎo)PC12細(xì)胞ERK1-2蛋白磷酸化表達(dá)的研究.pdf

1、通過(guò)自行設(shè)計(jì)的復(fù)合緩釋材料PDLLA/β-TCP/PRGD/NGF應(yīng)用于神經(jīng)組織的修復(fù)，不僅能夠提供神經(jīng)再生的支架空間，而且還能緩慢釋放神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞分化并激活內(nèi)源性組織修復(fù)機(jī)制的發(fā)生。將該神經(jīng)導(dǎo)管材料應(yīng)用于大鼠的坐骨神經(jīng)缺損實(shí)驗(yàn)，電生理檢測(cè)結(jié)果顯示經(jīng)材料修復(fù)的神經(jīng)組織與自體移植的功能效果無(wú)明顯差異，組織學(xué)觀察結(jié)果表明新生的神經(jīng)纖維數(shù)量多，形態(tài)較規(guī)則。這些結(jié)果充分表明了復(fù)合材料PDLLA/β-TCP/PRGD/NG

2、F在神經(jīng)導(dǎo)管應(yīng)用上的巨大前景，為進(jìn)一步研究該材料在神經(jīng)修復(fù)過(guò)程中的誘導(dǎo)效應(yīng)，從分子生物學(xué)的微觀角度深入論證材料中釋放的NGF在材料可誘導(dǎo)性因素中的主導(dǎo)作用是一個(gè)必要的研究環(huán)節(jié)。
　　 PDLLA/β-TCP/PRGD/NGF作為一種人工的導(dǎo)管材料在應(yīng)用于神經(jīng)修復(fù)過(guò)程中有兩大作用：其一是提供一個(gè)神經(jīng)修復(fù)的支架空間，其二是通過(guò)材料向神經(jīng)缺損空間不斷釋放神經(jīng)生長(zhǎng)因子等物質(zhì)，并提供由此形成的具有誘導(dǎo)神經(jīng)再生的局部微環(huán)境。PC12細(xì)胞來(lái)源

3、于褐家鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤，在NGF持續(xù)刺激下可生成一種類交感神經(jīng)樣細(xì)胞，這種誘導(dǎo)特性被廣泛應(yīng)用于神經(jīng)生物學(xué)的研究課題，NGF誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化的信號(hào)通路學(xué)說(shuō)基本形成。制備材料體外浸提液可近似模擬體內(nèi)形成的微環(huán)境，研究材料浸提液微環(huán)境誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化的信號(hào)通路對(duì)論證材料的可誘導(dǎo)性和組織再生的微觀機(jī)理具有重要意義。在NGF誘導(dǎo)PC12細(xì)胞作用的前期，采用ELISA和westernblot實(shí)驗(yàn)均可檢測(cè)到分化過(guò)程中的關(guān)鍵蛋白因子ERK1/

4、2磷酸化水平明顯升高，前期的研究表明PC12細(xì)胞經(jīng)PDLLA/β-TCP/PRGD/NGF材料浸提液誘導(dǎo)后能夠分化并產(chǎn)生軸突，本課題即采用這兩種實(shí)驗(yàn)方法實(shí)時(shí)檢測(cè)浸提液誘導(dǎo)PC12細(xì)胞ERK1/2磷酸化水平的變化，同時(shí)設(shè)置實(shí)驗(yàn)對(duì)照組PDLLA/β-TCP/PRGD浸提液和陰性對(duì)照組即無(wú)任何處理的PC12細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：浸提液在誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化的前20min能促使ERK1/2磷酸化水平的上升，且PDLLA/β-TCP/PRGD/NG