高磷對維持性血透患者微炎癥和氧化應激的影響及機制.pdf

1、背景:
　　 維持性血液透析（MHD）是終末期腎臟病患者最常用的替代治療方法之一。心血管并發(fā)癥是MHD患者首要死亡原因。MHD患者礦物質代謝異常普遍存在，其中高磷血癥表現(xiàn)尤為突出。高磷可直接或間接地促進MHD患者血管鈣化，導致心血管死亡率升高。MHD患者普遍存在微炎癥和氧化應激狀態(tài)，已證實微炎癥和氧化應激狀態(tài)也是MHD患者并發(fā)心血管病變的重要因素。目前MHD患者高磷血癥與氧化應激及微炎癥狀態(tài)的關系及機制尚不清楚。核轉錄因子（NF

2、-κB）信號通路是導致炎癥的主要途徑之一，NADPH氧化酶/NOX家族蛋白是生成ROS的重要來源。因此我們推測MHD患者高磷血癥可能通過激活外周單個核細胞NF-κB和NOX2促進炎癥介質和氧化應激產(chǎn)物增加。本研究初步探討MHD患者高磷血癥與微炎癥、氧化應激的關系及可能的機制。
　　 目的:
　　 探討高磷對維持性血透患者單個核細胞NF-κB活化、NOX2/gp91表達及炎癥介質、氧化應激產(chǎn)物的影響，進一步了解高磷對維持性

3、血透患者微炎癥及氧化應激的影響及機制。
　　 方法:
　　 1.分離正常人和MHD患者PBMC及血清，分別從mRNA及蛋白水平檢測NF-κBp65、NOX2/gp91的表達，并檢測血清IL-6和MDA的含量。
　　 2.分離MHD患者PBMC，常規(guī)進行培養(yǎng)并用不同濃度的磷酸二氫鈉（1.52.55.5mmol/L）作用PBMC24h，觀察濃度的影響。用磷酸二氫鈉(5.5mmol/l)作用PBMC不同時間點:6h、1

4、2h、24h，觀察高磷作用不同時間的影響。Real Time PCR及Western Blot分別從RNA及蛋白水平檢測NF-κ Bp65及NOX2/gp91的表達。收集細胞培養(yǎng)液上清，ELISA檢測IL-6含量，硫氮巴比妥酸法檢測MDA含量。
　　 結果:
　　 1.MHD組PBMC中NF-κ Bp65、NOX2/gp91 mRNA及Phospho-NF-κBp65、NOX2/gp91蛋白表達明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計

5、學意義(P＜0.01);MHD患者血清IL-6、MDA水平明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　 2.不同濃度磷酸二氫鈉作用24h，NF-κBp65、NOX2/gp91 mRNA表達及Phospho-NF-κ Bp65、NOX2/gp91蛋白表達呈逐漸增高的趨勢呈劑量依賴性，5.5mmol/l作用24h后表達最強，與1.5mmol/l比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　 3.高濃度磷酸二氫鈉(5

6、.5mmol/l)分別作用6h、12h、24h，NF-κ Bp65、NOX2/gp91 mRNA及Phospho-NF-κ Bp65、NOX2/gp91蛋白表達呈逐漸增高趨勢呈時間依賴性，差異有統(tǒng)有計學意義(P＜0.01)。
　　 4.高磷作用于MHD患者PBMC，培養(yǎng)上清IL-6、MDA產(chǎn)生增加，呈濃度、劑量依賴性(P＜0.01)。
　　 5.MHD患者PBMC NF-κBp65mRNA表達及Phospho-NF-κB

7、p65蛋白與培養(yǎng)液上清IL-6產(chǎn)生呈正相關，相關系數(shù)分別為r=0.741、r=0.934; PBMC NOX2/gp91mRNA及蛋白表達與培養(yǎng)液上清IL-6濃度呈正相關，相關系數(shù)分別為r=0.723、r=0.689。
　　 結論：
　　 1.MHD患者PBMC NF-κB、NOX2處于活化狀態(tài)，血清IL-6、MDA產(chǎn)生增加，證實MHD患者處于微炎癥和氧化應激狀態(tài)。
　　 2.高磷作用于MHD患者PBMC，NF-