大豆疫霉菌的分子檢測(cè).pdf

1、由大豆疫霉菌(Phytophthora sojae Kauf.et Gerd.)引起的大豆疫霉根腐病(Soybean Phytophthora Root Rot)是大豆毀滅性病害之一,是我國(guó)的重要對(duì)外檢疫對(duì)象.本實(shí)驗(yàn)利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)研究大豆疫霉菌的分子特征,建立AFLP反應(yīng)體系,根據(jù)病原菌DNA水平在種間的變異特點(diǎn),尋找到大豆疫霉菌的特異性AFLP擴(kuò)增條帶,并將其轉(zhuǎn)化為更為穩(wěn)定方便的SCAR標(biāo)記.在此技術(shù)的基礎(chǔ)上,初步建立大豆疫

2、霉菌的快速檢測(cè)技術(shù)體系.研究獲得的主要結(jié)果如下:1.通過單孢分離技術(shù),純化大豆疫霉菌菌株34個(gè)并鑒定了各菌株的毒力類型;培養(yǎng)其它卵菌9個(gè)和大豆種傳、土傳真菌23個(gè),為本研究和其它相關(guān)研究奠定良好的病原學(xué)基礎(chǔ).2.建立了適用于大豆疫霉菌的AFLP反應(yīng)體系;從112對(duì)引物中篩選出56對(duì)多態(tài)性引物,經(jīng)過擴(kuò)增,在引物對(duì)E-CG/M-AG,E-TC/M-CC,E-AT/M-AC獲得了對(duì)大豆疫霉菌的特異性擴(kuò)增條帶,其中引物對(duì)E-CG/M-AG在大豆

3、疫霉菌中能特異地?cái)U(kuò)增出約660 bp的片段,該片段用于進(jìn)一步研究.3.將特異性擴(kuò)增片段回收、克隆、測(cè)序、分析序列,根據(jù)序列特征設(shè)計(jì)引物.檢測(cè)結(jié)果表明,已成功將該AFLP標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記.4.以SCAR標(biāo)記引物進(jìn)行特異性的檢測(cè),能在大豆疫霉菌中穩(wěn)定地?cái)U(kuò)增出大小約為280 bp的特異性片段,而其它參照菌中則無擴(kuò)增.該SCAR標(biāo)記的檢測(cè)靈敏度達(dá)到10 pg.模擬實(shí)際檢測(cè)中可能出現(xiàn)的情況,在大豆疫霉菌DNA中混入其它真菌的DNA,仍能特異