大豆疫霉菌的分子檢測.pdf

1、由大豆疫霉菌(Phytophthora sojae Kauf.et Gerd.)引起的大豆疫霉根腐病(Soybean Phytophthora Root Rot)是大豆毀滅性病害之一,是我國的重要對外檢疫對象.本實驗利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)研究大豆疫霉菌的分子特征,建立AFLP反應(yīng)體系,根據(jù)病原菌DNA水平在種間的變異特點,尋找到大豆疫霉菌的特異性AFLP擴增條帶,并將其轉(zhuǎn)化為更為穩(wěn)定方便的SCAR標(biāo)記.在此技術(shù)的基礎(chǔ)上,初步建立大豆疫

2、霉菌的快速檢測技術(shù)體系.研究獲得的主要結(jié)果如下:1.通過單孢分離技術(shù),純化大豆疫霉菌菌株34個并鑒定了各菌株的毒力類型;培養(yǎng)其它卵菌9個和大豆種傳、土傳真菌23個,為本研究和其它相關(guān)研究奠定良好的病原學(xué)基礎(chǔ).2.建立了適用于大豆疫霉菌的AFLP反應(yīng)體系;從112對引物中篩選出56對多態(tài)性引物,經(jīng)過擴增,在引物對E-CG/M-AG,E-TC/M-CC,E-AT/M-AC獲得了對大豆疫霉菌的特異性擴增條帶,其中引物對E-CG/M-AG在大豆

3、疫霉菌中能特異地擴增出約660 bp的片段,該片段用于進(jìn)一步研究.3.將特異性擴增片段回收、克隆、測序、分析序列,根據(jù)序列特征設(shè)計引物.檢測結(jié)果表明,已成功將該AFLP標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記.4.以SCAR標(biāo)記引物進(jìn)行特異性的檢測,能在大豆疫霉菌中穩(wěn)定地擴增出大小約為280 bp的特異性片段,而其它參照菌中則無擴增.該SCAR標(biāo)記的檢測靈敏度達(dá)到10 pg.模擬實際檢測中可能出現(xiàn)的情況,在大豆疫霉菌DNA中混入其它真菌的DNA,仍能特異