BATF2的表達(dá)與結(jié)直腸癌預(yù)后相關(guān)并介導(dǎo)增殖抑制作用.pdf

1、BATF2的表達(dá)與結(jié)直腸癌預(yù)后相關(guān)
　　一、背景:
　　結(jié)直腸癌是一種嚴(yán)重威脅全世界人民生命健康的惡性腫瘤,盡管醫(yī)療水平在不斷地進(jìn)步,其發(fā)病率和死亡率卻仍然在不斷升高[1][2]?？刂坪徒档徒Y(jié)直腸癌的發(fā)病率與死亡率成為亟待解決的問題。因此,找到一種能預(yù)測(cè)患者預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物,并針對(duì)其表達(dá)制定個(gè)體化治療方案,從而增加患者的生存率和無疾病生存率變得愈發(fā)重要。
　　BATF2,又稱SARI,堿性亮氨酸拉鏈蛋白BATF亞家族

2、中的一員,它是一種由I型干擾素誘導(dǎo)的AP-1抑制劑[3]。2008年以來,有研究表明BATF2在人類正常組織中高表達(dá),但是在對(duì)應(yīng)的腫瘤組織中卻低表達(dá)。在腫瘤細(xì)胞中,過表達(dá)BATF2能夠顯著抑制其增殖,然而在正常細(xì)胞中,其過表達(dá)卻不會(huì)產(chǎn)生明顯的抑制作用[3]。BATF2這種特異性的抑癌作用與許多抑癌基因的特征相吻合。然而,BATF2在結(jié)直腸癌中的確切作用則需要用大量的臨床標(biāo)本予以驗(yàn)證。
　　此外,2008年的首次報(bào)道中,研究者提出B

3、ATF2定位在細(xì)胞核,并與AP-1結(jié)合而發(fā)揮抑癌作用[3]。然而,之后所有針對(duì)BATF2的研究都停留在其表達(dá)量的層面上,并未涉及對(duì)其亞細(xì)胞定位的專項(xiàng)研究。甚至有不止一項(xiàng)研究結(jié)果所展示的免疫組化圖片顯示BATF2定位于癌細(xì)胞的胞漿[4][5],這與BATF2在首次報(bào)道中提到的定位在細(xì)胞核中相違背。但是,這些研究并未對(duì)BATF2為什么出現(xiàn)在腫瘤細(xì)胞胞漿提出合理的解釋,更未對(duì)其亞細(xì)胞定位的臨床意義做深入探究。
　　二、目的:
　　

4、對(duì)BATF2在結(jié)直腸癌和癌旁組織、細(xì)胞中的表達(dá)情況及其對(duì)患者預(yù)后的影響進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)研究,并對(duì)其不同的亞細(xì)胞定位進(jìn)行初步探討。
　　三、方法:
　　1、采用免疫組化和Western Blot的方法檢測(cè)人類結(jié)直腸癌組織和細(xì)胞系中BATF2的表達(dá)情況,并與CRC患者性別、年齡、器官、部位、腫瘤大小、分期、分級(jí)等臨床病理學(xué)參數(shù)的進(jìn)行相關(guān)性分析。利用Kaplan-Meier生存曲線、多因素Cox模型,評(píng)估BATF2表達(dá)水平與患者生存及預(yù)

5、后的關(guān)系。
　　2、利用免疫組化、免疫熒光和Western Blot方法,檢測(cè)BATF2在癌和癌旁組織,結(jié)直腸癌與正常細(xì)胞系中的胞核、胞漿的表達(dá)情況。對(duì)BATF2在CRC和癌旁組織中的亞細(xì)胞定位進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,并進(jìn)一步探討不同的定位與上述臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系。用Kaplan-Meier法研究BATF2的不同亞細(xì)胞定位與生存的關(guān)系,并用Cox模型分析BATF2的亞細(xì)胞定位對(duì)CRC患者預(yù)后的影響。
　　3、在結(jié)腸癌細(xì)胞中,采用慢

6、病毒干擾技術(shù)抑制BATF2表達(dá),并分別利用CCK-8法檢測(cè)其生長速率、克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其克隆形成能力、流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)其細(xì)胞周期。
　　四、結(jié)果:
　　1、BATF2在CRC腫瘤組織中的表達(dá)顯著低于癌旁組織(P<0.001),其表達(dá)水平與結(jié)直腸癌腫瘤的大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期密切相關(guān)。而且高表達(dá)BATF2的CRC患者總生存期和無疾病生存期也顯著高于BATF2低表達(dá)的患者(P<0.001),同時(shí),其死亡風(fēng)險(xiǎn)及疾病復(fù)

7、發(fā)風(fēng)險(xiǎn)顯著低于BATF2低表達(dá)患者(P<0.001)。
　　2、BATF2在CRC細(xì)胞核中的表達(dá)顯著低于CRC癌旁組織細(xì)胞核(P<0.001),但是BATF2在CRC和癌旁組織細(xì)胞漿中的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異( P=0.8759)。細(xì)胞核中BATF2的表達(dá)與結(jié)直腸癌的大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床病理學(xué)分期密切相關(guān)。并且,BATF2的在核內(nèi)高表達(dá)的患者比在核內(nèi)低表達(dá)的患者臨床預(yù)后好,同時(shí)死亡風(fēng)險(xiǎn)和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)也要小。
　　3、低表達(dá)

8、BATF2的CRC細(xì)胞增殖速率明顯加快,這種增殖可能是通過細(xì)胞周期得以實(shí)現(xiàn)的。
　　五、結(jié)論:
　　1、BATF2在CRC組織和細(xì)胞中表達(dá)顯著減少,可以作為結(jié)直腸癌患者預(yù)后的指標(biāo)。
　　2、BATF2在CRC組織細(xì)胞胞核中的表達(dá)顯著低于CRC癌旁組織細(xì)胞胞核,其核表達(dá)量可以作為患者的預(yù)后指標(biāo)。
　　3、BATF2表達(dá)量的降低可以促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖。
　　AG490上調(diào)BATF2表達(dá)抑制淋巴瘤細(xì)胞增殖

9、　　一、背景
　　淋巴瘤在是血液系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,在我國的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì),嚴(yán)重威脅了人們的生命健康和生活質(zhì)量。積極有效的治療措施可為淋巴瘤患者帶來福音。然而,雖然聯(lián)合化療方案能使約四分之三的患者獲益,但是仍有一部分患者對(duì)其不敏感[1]。因此,研究者們逐漸將目光轉(zhuǎn)向分子治療水平上,以改善治療方案。
　　AG490,是一種結(jié)構(gòu)類似于酪氨酸,由人工合成的苯亞甲基丙二腈脂類衍生物。它可特異性抑制在腫瘤中異常激活的JAK

10、2/STAT3信號(hào)通路,進(jìn)而產(chǎn)生抑癌作用[2]。研究結(jié)果表明,AG490在白血病[2]、前列腺癌[3]、乳腺癌[4]和結(jié)腸癌[5]中具有良好的抗瘤效應(yīng)。尤其在白血病的研究上,AG490不僅可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡,還可以不影響到正常前體造血干細(xì)胞的生長及成熟[6]。因此AG490蘊(yùn)含著巨大的臨床應(yīng)用前景,其機(jī)制研究也隨之成為研究熱點(diǎn)。因此,本研究擬對(duì)AG490抑制淋巴瘤細(xì)胞生長的效應(yīng)及其作用機(jī)制進(jìn)行探討,為AG490應(yīng)用于臨床提供部分實(shí)

11、驗(yàn)依據(jù)。
　　二、方法
　　分別用不同劑量的AG490(0μM、2μM、20μM、50μM、200μM)處理淋巴瘤細(xì)胞Namalwa和JeKo-1、Jurkat T淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞和THP-1單核細(xì)胞性白血病細(xì)胞24小時(shí)。用CCK-8法檢測(cè)不同濃度AG490對(duì)上述細(xì)胞的增殖抑制作用,并用Real Time PCR法檢測(cè)各處理細(xì)胞中BATF2 mRNA水平的變化,Western blotting法檢測(cè)蛋白水平的變化。siR

12、NA法抑制Namalwa細(xì)胞中BATF2的表達(dá),再用CCK-8法檢測(cè)AG490對(duì)該細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)。
　　三、結(jié)果
　　AG490呈劑量依賴性地抑制Namalwa、Jurkat和JeKo-1細(xì)胞的增殖(P<0.05),同時(shí)上調(diào)其BATF2的 mRNA水平和蛋白水平(P<0.05)。對(duì)于無顯著抑制作用的THP-1細(xì)胞,BATF2的表達(dá)無明顯改變(P>0.05)。siRNA法抑制Namalwa細(xì)胞中BATF2表達(dá)后,AG490