口腔鱗癌DNL中檢測造血干細胞的研究.pdf

1、上海第二醫(yī)科大學碩士學位論文口腔鱗癌DNL中檢測造血干細胞的研究姓名：葉冬霞申請學位級別：碩士專業(yè)：口腔頜面外科指導教師：郭偉2003.5.1上海笫二醫(yī)利大學碩士畢業(yè)論文中文摘要目的頭頸部惡性腫瘤約占全身惡性腫瘤的5IO％。其中El腔鱗癌在頭頸部惡生腫瘤中占有相當大的比例，可發(fā)生于各年齡和口腔各部位。目前，治療口腔鱗癌的主要方法有：手術、放療和化療。化療由于其提高癌癥患者生存率、減少腫瘤轉移與復發(fā)，逐漸被患者接受。但化療也能產生不良反應

2、，1984年Hryniuk等首次報道了化療藥劑量與療效有相關性的臨床觀察結果。常規(guī)劑量化療因瘤體內藥物分布濃度過低和骨髓內、外毒性反應，嚴重限制了化療在口腔腫瘤臨床的應用和療效。在晚期或轉移性口腔惡性腫瘤的治療中，上述問題更為突出。雖然大劑量化療能增加瘤體內的藥物濃度，但會引起嚴重的骨髓內、外毒性反應。因此，迫切需要開辟一條新的治療途徑。隨著科學的發(fā)展和造血干細胞的發(fā)現(xiàn)，臨床應用超大劑量化療已成為現(xiàn)實，并逐漸在血液性腫瘤和實體瘤方面廣泛

3、應用。目前有關造血干細胞的研究主要集中在骨髓、外周血和臍血，而有關淋巴結中是否存在造血干細胞的研究甚少。因此，本研究擬通過研究口腔鱗癌頸部淋巴結清掃的石蠟標本和DNL(draininglymphnodelymphocyte，引流區(qū)淋巴結細胞)，進行靜態(tài)、動態(tài)和定性分析，從細胞和分子水平檢測口腔鱗癌DNL中是否存在造血于細胞。方法1首先對口腔鱗癌頸清石蠟標本進行免疫組化檢測，觀察是否有CD34抗原陽性細胞。2新鮮口腔鱗癌頸清標本，機械法處

4、理后梯度離心，得到口腔鱗癌DNL細胞。將細胞制成涂片，免疫組化檢測CD34抗原表達。3提取DNL細胞總RNA后RTPCR檢測CD34mRNA的表達。Tca8113細胞系和骨髓細胞分別作為陰性和陽性對照。4取頸清標本和骨髓標本，分離得到DNL和單個核細胞，在粒細胞集落刺激因子(G，CSF)刺激下進行細胞培養(yǎng)，檢測細胞集落形成。結果t9例頸清淋巴結石蠟標本中有14例CD34抗原免疫組化染色呈陰性，其中5例可見弱陽性染色。體夕卜DNL細胞涂片