伴結(jié)腸痙攣便秘患者腸壁神經(jīng)特異性烯醇化酶及S-100的表達(dá).pdf

1、目的:在便秘患者影像學(xué)檢查及手術(shù)中常發(fā)現(xiàn)局部結(jié)腸腸管痙攣，其遠(yuǎn)端、近端腸管多無(wú)異常表現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用腸神經(jīng)系統(tǒng)特異性標(biāo)志物神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和S-100，對(duì)有腸管痙攣表現(xiàn)的便秘患者腸壁組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色檢查，檢查腸壁神經(jīng)叢及其組成成份有無(wú)異常改變，探討便秘患者結(jié)腸痙攣的病因，為今后的治療提供幫助。
　　方法:
　　1標(biāo)本采集
　　1.1標(biāo)本的選擇:所有取材對(duì)象均為經(jīng)結(jié)腸傳輸試驗(yàn)診斷為慢傳輸型便秘的手術(shù)患

2、者，手術(shù)方式均為結(jié)腸次全切除術(shù)。以鋇灌腸檢查和（或）術(shù)中發(fā)現(xiàn)有腸管痙攣者19例作為痙攣組，無(wú)腸管痙攣表現(xiàn)的便秘患者20例作為非痙攣組;痙攣組男性6例，女性13例，患者年齡范圍31-74歲，中位年齡為63歲;非痙攣組男性3例，女性17例，患者年齡范圍18-66歲，中位年齡48歲。
　　1.2采集方法:術(shù)中腸管標(biāo)本取下后切取全層腸壁組織，大小為2×2cm，注意去除鉗夾部位腸壁。取材部位為乙狀結(jié)腸痙攣段和橫結(jié)腸，非痙攣組取材部位為乙狀結(jié)

3、腸、橫結(jié)腸。
　　1.3標(biāo)本處理:標(biāo)本取下經(jīng)PBS緩沖液沖洗后置于4％多聚甲醛中固定，24小時(shí)后撈出后修整標(biāo)本，經(jīng)梯度酒精脫水，二甲苯透明，浸蠟，包埋制成石蠟標(biāo)本。
　　2染色鏡檢
　　2.1石蠟標(biāo)本切片制備:應(yīng)用輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)切片，溫水漂浮法撈片，烤干備用。
　　2.2染色:切片經(jīng)脫蠟、水化、抗原修復(fù)、1％甲醇雙氧水孵育、血清封閉后滴加一抗(NSE、S-100)及二抗，然后經(jīng)DAB顯色、蘇木素復(fù)染、梯度酒精脫水等

4、步驟，最后封片。
　　2.3鏡檢:在光學(xué)顯微鏡下觀察腸神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)神經(jīng)纖維的狀態(tài)和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的形態(tài)，計(jì)數(shù)粘膜下層和肌層內(nèi)神經(jīng)叢、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目，方法為同一切片隨機(jī)選取5個(gè)低倍鏡視野（視野不重疊）分別計(jì)數(shù)粘膜下層及肌層的神經(jīng)叢數(shù)和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞個(gè)數(shù)（高倍鏡下進(jìn)行辨認(rèn)）。
　　2.4采圖:分別對(duì)兩組患者腸壁各層神經(jīng)叢和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞不同視野下的表現(xiàn)進(jìn)行采圖，觀察到有異常改變的神經(jīng)纖維、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞變化時(shí)采圖。
　　3數(shù)據(jù)處理:數(shù)據(jù)采用

5、“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（(x)±s）表示，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0對(duì)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，檢測(cè)方法為兩樣本獨(dú)立t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。
　　結(jié)果:
　　1鏡下表現(xiàn):
　　1.1 NSE染色:非痙攣組粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢內(nèi)可見(jiàn)呈深棕色的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，分布大小均勻，神經(jīng)纖維規(guī)則;痙攣組可見(jiàn)，深棕色的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量、體積發(fā)生改變，神經(jīng)纖維紊亂增生。
　　1.2 S-100染色:非痙攣組粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢可見(jiàn)，深

6、染的神經(jīng)叢中多個(gè)細(xì)胞狀的“空白區(qū)”，即神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，大小形態(tài)規(guī)則，神經(jīng)纖維排布規(guī)則;痙攣組可見(jiàn)，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞大小、形態(tài)、數(shù)量有變化，神經(jīng)纖維多紊亂增生。
　　2 NSE染色分析結(jié)果:神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量:與非痙攣組比較，痙攣組痙攣段腸壁粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢內(nèi)的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量均有下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，橫結(jié)腸段粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)神經(jīng)叢數(shù)量:兩組患者在相對(duì)應(yīng)部位腸管的腸

7、壁神經(jīng)叢數(shù)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3 S-100染色分析結(jié)果:神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量:與非痙攣組比較，痙攣組痙攣段腸管粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢內(nèi)的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量均有下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，橫結(jié)腸段粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);神經(jīng)叢數(shù)量:兩組患者在相對(duì)應(yīng)部位腸管和神經(jīng)叢中的神經(jīng)叢數(shù)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　便秘患者結(jié)腸痙