伴結腸痙攣便秘患者腸壁神經(jīng)特異性烯醇化酶及S-100的表達.pdf

1、目的:在便秘患者影像學檢查及手術中常發(fā)現(xiàn)局部結腸腸管痙攣，其遠端、近端腸管多無異常表現(xiàn)。本實驗應用腸神經(jīng)系統(tǒng)特異性標志物神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和S-100，對有腸管痙攣表現(xiàn)的便秘患者腸壁組織進行免疫組織化學染色檢查，檢查腸壁神經(jīng)叢及其組成成份有無異常改變，探討便秘患者結腸痙攣的病因，為今后的治療提供幫助。
　　方法:
　　1標本采集
　　1.1標本的選擇:所有取材對象均為經(jīng)結腸傳輸試驗診斷為慢傳輸型便秘的手術患

2、者，手術方式均為結腸次全切除術。以鋇灌腸檢查和（或）術中發(fā)現(xiàn)有腸管痙攣者19例作為痙攣組，無腸管痙攣表現(xiàn)的便秘患者20例作為非痙攣組;痙攣組男性6例，女性13例，患者年齡范圍31-74歲，中位年齡為63歲;非痙攣組男性3例，女性17例，患者年齡范圍18-66歲，中位年齡48歲。
　　1.2采集方法:術中腸管標本取下后切取全層腸壁組織，大小為2×2cm，注意去除鉗夾部位腸壁。取材部位為乙狀結腸痙攣段和橫結腸，非痙攣組取材部位為乙狀結

3、腸、橫結腸。
　　1.3標本處理:標本取下經(jīng)PBS緩沖液沖洗后置于4％多聚甲醛中固定，24小時后撈出后修整標本，經(jīng)梯度酒精脫水，二甲苯透明，浸蠟，包埋制成石蠟標本。
　　2染色鏡檢
　　2.1石蠟標本切片制備:應用輪轉式切片機切片，溫水漂浮法撈片，烤干備用。
　　2.2染色:切片經(jīng)脫蠟、水化、抗原修復、1％甲醇雙氧水孵育、血清封閉后滴加一抗(NSE、S-100)及二抗，然后經(jīng)DAB顯色、蘇木素復染、梯度酒精脫水等

4、步驟，最后封片。
　　2.3鏡檢:在光學顯微鏡下觀察腸神經(jīng)系統(tǒng)內神經(jīng)纖維的狀態(tài)和神經(jīng)節(jié)細胞的形態(tài)，計數(shù)粘膜下層和肌層內神經(jīng)叢、神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)目，方法為同一切片隨機選取5個低倍鏡視野（視野不重疊）分別計數(shù)粘膜下層及肌層的神經(jīng)叢數(shù)和神經(jīng)節(jié)細胞個數(shù)（高倍鏡下進行辨認）。
　　2.4采圖:分別對兩組患者腸壁各層神經(jīng)叢和神經(jīng)節(jié)細胞不同視野下的表現(xiàn)進行采圖，觀察到有異常改變的神經(jīng)纖維、神經(jīng)節(jié)細胞變化時采圖。
　　3數(shù)據(jù)處理:數(shù)據(jù)采用

5、“均數(shù)±標準差”（(x)±s）表示，應用統(tǒng)計學軟件SPSS19.0對數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，檢測方法為兩樣本獨立t檢驗，檢驗水準為α=0.05。
　　結果:
　　1鏡下表現(xiàn):
　　1.1 NSE染色:非痙攣組粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢內可見呈深棕色的神經(jīng)節(jié)細胞，分布大小均勻，神經(jīng)纖維規(guī)則;痙攣組可見，深棕色的神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量、體積發(fā)生改變，神經(jīng)纖維紊亂增生。
　　1.2 S-100染色:非痙攣組粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢可見，深

6、染的神經(jīng)叢中多個細胞狀的“空白區(qū)”，即神經(jīng)節(jié)細胞，大小形態(tài)規(guī)則，神經(jīng)纖維排布規(guī)則;痙攣組可見，神經(jīng)節(jié)細胞大小、形態(tài)、數(shù)量有變化，神經(jīng)纖維多紊亂增生。
　　2 NSE染色分析結果:神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量:與非痙攣組比較，痙攣組痙攣段腸壁粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢內的神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量均有下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，橫結腸段粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量的差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)神經(jīng)叢數(shù)量:兩組患者在相對應部位腸管的腸

7、壁神經(jīng)叢數(shù)量差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　3 S-100染色分析結果:神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量:與非痙攣組比較，痙攣組痙攣段腸管粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢內的神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量均有下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，橫結腸段粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量的差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05);神經(jīng)叢數(shù)量:兩組患者在相對應部位腸管和神經(jīng)叢中的神經(jīng)叢數(shù)量差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結論:
　　便秘患者結腸痙