曲格列酮、高糖、IL-1β對人腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體的影響.pdf

1、目的：通過流式細(xì)胞儀及RT－PCR方法觀察人腎小管上皮細(xì)胞（HKC）上EPCR表達(dá)情況，及葡萄糖、IL-1β對HKC上EPCR表達(dá)的影響，旨在探討高糖、IL-1β致腎損害的機制。同時，觀察曲格列酮對高糖、IL-1β調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體作用的影響，探討曲格列酮抑制腎間質(zhì)纖維化達(dá)到腎保護(hù)的新機制。
　　1、高糖、IL-1β對人腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體表達(dá)影響的研究
　　方法：將人腎小管上皮細(xì)胞（HKC）進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，然

2、后采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測培養(yǎng)細(xì)胞上EPCR的表達(dá)。采用不同濃度（0mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、30mmol/L、50mmol/L）的D-葡萄糖作用于HKC細(xì)胞系，觀察不同濃度D-葡萄糖對EPCR基因表達(dá)的影響；同時以50mmol/L的D-葡萄糖分別作用不同時間（0、3h、6h、12h、24h），觀察D-葡萄糖不同作用時間對EPCR基因表達(dá)的影響。
　　采用不同濃度（0ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10

3、ng/ml、20ng/ml）的 IL-1β作用于HKC細(xì)胞系，觀察不同濃度IL-1β對EPCR基因表達(dá)的影響；同時以20ng/ml的IL-1β分別作用不同時間（0h、3h、6h、12h、24h），觀察IL-1β不同作用時間對EPCR基因表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　1. EPCR在HKC上有很高表達(dá)，達(dá)97.9%。
　　2.高糖明顯下調(diào)HKC細(xì)胞中EPCR mRNA的表達(dá)，特別是在D-葡萄糖濃度為30mmol/L、50

4、mmol/L時EPCR mRNA的表達(dá)呈顯著性下降（p<0.01）并有明顯的劑量反應(yīng)關(guān)系。50mmol/L的D-葡萄糖作用HKC細(xì)胞12h和24h時EPCR表達(dá)明顯受到抑制（p<0.01）。D-葡萄糖對EPCR mRNA表達(dá)的影響與作用時間有明顯的線性關(guān)系。
　　3. IL-1β在2ng/ml、5ng/ml時HKC細(xì)胞EPCR mRNA的表達(dá)量未見明顯減低，在10ng/ml時HKC細(xì)胞EPCR mRNA的表達(dá)量開始明顯降低（p<0

5、.01）。20ng/ml IL-1β處理3h時即能明顯下調(diào)HKC細(xì)胞中EPCR mRNA的表達(dá)，EPCR mRNA的表達(dá)變化與作用時間呈明顯的時效關(guān)系。
　　結(jié)論：
　　1.人腎小管上皮細(xì)胞高表達(dá)EPCR。
　　2. D-葡萄糖能明顯抑制HKC上EPCR，呈時間、劑量依賴性。IL-1β能明顯抑制HKC上EPCR，呈時間依賴性。
　　3. EPCR表達(dá)下降可能是高糖、IL-1β致腎損害的機制之一。
　　2、曲

6、格列酮對高糖、IL-1β調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體作用的研究
　　方法：將HKC細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞生長至80%融合后分為三個組，第一組為空白對照組，同樣條件下不加任何藥物培養(yǎng)24小時。第二組為陽性對照組，分別加入含50mmol/L的D-葡萄糖、20ng/ml的IL-1β的培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時，不加曲格列酮。第三組為實驗組，分為四個系列，第一系列用含0μmol/L曲格列酮的培養(yǎng)基培養(yǎng)12h后分別加入含50mmol/L的D-葡萄糖、20

7、ng/ml的IL-1β的培養(yǎng)基，再培養(yǎng)24h。第二系列、第三系列、第四系列培養(yǎng)方法與第一系列相同，但曲格列酮濃度分別為5umol/L、10umol/L、20umol/L。檢測各組細(xì)胞 EPCR的表達(dá)，觀察不同濃度曲格列酮對葡萄糖、IL-1β調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體的作用。
　　結(jié)果：
　　1.50mmol/L的D-葡萄糖、20ng/ml的IL-1β能明顯抑制HKC細(xì)胞中EPCR的表達(dá)。
　　2.在 D-葡萄糖、IL-1β