細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子和血管內(nèi)皮生長因子-C在鼻咽癌中的表達及其意義.pdf

1、背景與目的:
　　鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我國南方的一種高發(fā)腫瘤,具有易浸潤性和高轉(zhuǎn)移性的特點,常早期發(fā)生頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,據(jù)統(tǒng)計,有45％~50%的患者是以頸部腫塊為首發(fā)癥狀。因此,研究鼻咽癌的生長、轉(zhuǎn)移機制對我國鼻咽癌的防治將具有重要意義。細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子(Extracellular matrix metalloproteinases inducer, EMMPRIN)是免

2、疫球蛋白超家族的一個成員,在許多腫瘤高表達,它可通過上調(diào)透明質(zhì)酸的產(chǎn)量來促進腫瘤的生長,通過誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的產(chǎn)生來促進腫瘤血管的增生,也能通過刺激間質(zhì)細胞及腫瘤細胞本身產(chǎn)生多種基質(zhì)金屬蛋白酶來降解基底膜和細胞外基質(zhì),從而促進腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移。血管內(nèi)皮生長因子-C(Vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)

3、是第一個被發(fā)現(xiàn)的促進淋巴管生長的因子,參與多種腫瘤的淋巴管增生和淋巴道轉(zhuǎn)移,而其在鼻咽癌的研究較少,有報道表明 VEGF-C的表達與鼻咽癌細胞的增生和轉(zhuǎn)移成正相關(guān)。總之,EMMPRIN和VEGF-C高表達是許多腫瘤的惡性表型,它們能夠促進腫瘤的生長、腫瘤血管和淋巴管增生及腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移,而這些作用都可能呈現(xiàn)在鼻咽癌演進過程中。本實驗通過免疫組化、原位雜交、圖像分析等技術(shù)對 EMMPRIN、VEGF-C及相關(guān)指標在鼻咽癌中的表達情況進行檢

4、測,探討它們在鼻咽癌生長、血管生成及頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中的作用,為鼻咽癌的防治提供理論基礎(chǔ)。
　　材料與方法:
　　1.研究對象收集汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院及汕頭市中心醫(yī)院1996~2005年間進行鼻咽部和/或頸部淋巴結(jié)活檢的組織標本,經(jīng)臨床病理診斷,將標本分成三組:30例鼻咽粘膜慢性炎癥(Chronic nasopharyngitis, CN),71例鼻咽癌原發(fā)灶(Primary nasopharyngeal carci

5、noma, P-NPC),36例鼻咽癌頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶(Metastatic nasopharyngeal carcinoma, M-NPC)。在鼻咽癌原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中,有34對來自同一病人(從2868例鼻咽癌病例中篩選而來),即配對組鼻咽癌原發(fā)灶(Paired primary nasopharyngeal carcinoma, PP-NPC)和配對組鼻咽癌轉(zhuǎn)移灶(Paired metastatic nasopharyngeal car

6、cinoma, PM-NPC)。
　　2.HE染色作有絲分裂指數(shù)計數(shù)。
　　3.圖像分析法對組織切片進行蘇木素染色,利用Leica Qwin standard Y2.8圖象分析系統(tǒng)對標本細胞核進行形態(tài)定量。
　　4.免疫組織化學(xué)染色 Envision Labelled Peroxidase System(ELPS)二步法檢測石蠟組織切片中EMMPRIN、 MMP-3、VEGF、VEGF-C、CD34及PCNA蛋白的表達

7、情況。
　　5.原位雜交從免疫組化剩余標本中選取組織結(jié)構(gòu)完整的標本47例,其中包括P-NPC31例、M-NPC16例,檢測組織切片中EMMPRIN mRNA的表達情況,與免疫組織化學(xué)結(jié)果進行一致性分析。
　　結(jié)果:
　　1.有絲分裂指數(shù)計數(shù)
　　鼻咽慢性炎癥、鼻咽癌原發(fā)灶及鼻咽癌轉(zhuǎn)移灶中有絲分裂指數(shù)(Mitotic index, MI)分別為0.26±0.44,3.00±1.66,4.70±2.53,各組間差異均

8、有高度顯著性(P<0.01);同一病人鼻咽癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶MI分別為2.27±1.01,4.65±2.68,差異亦具有高度顯著性(P<0.001)。
　　2.形態(tài)定量結(jié)果
　　與鼻咽慢性炎癥比較,鼻咽癌原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中癌細胞細胞核的面積、周長、長軸、短軸均顯著增加(P<0.01),但圓度無差別。但鼻咽癌原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶之間、配對組鼻咽癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶之間細胞核形態(tài)無差別。
　　3.免疫組化結(jié)果
　　EMMPRIN蛋

9、白陽性產(chǎn)物主要表達于癌細胞和部分上皮細胞的胞漿或胞膜,呈棕黃色顆粒狀。EMMPRIN在NPC中總體陽性率為67.29%,明顯高于CN的陽性率30.00%(P<0.001)。EMMPRIN在CN、P-NPC和M-NPC中的表達逐步增高,P-NPC和M-NPC陽性率顯著高于CN組(P<0.01),M-NPC陽性率80.56%顯著高于P-NPC60.56%(P=0.037)。另外,配對比較PP-NPC與PM-NPC,差異亦具顯著性(P=0.0

10、12)。
　　MMP-3的陽性信號主要位于癌細胞和部分上皮細胞的胞漿,個別淋巴細胞、成纖維細胞胞漿亦呈陽性。MMP-3在P-NPC和M-NPC中的陽性率分別為35.21%、44.44%,明顯高于CN13.33%(P=0.026和0.005),但在P-NPC和M-NPC中的表達無差異,PP-NPC和PM-NPC之間亦無差異。
　　PCNA陽性產(chǎn)物位于癌細胞和部分上皮細胞的胞核,呈棕褐色。PCNA在CN、P-NPC和M-NPC中

11、的陽性率分別為24.14%、59.38%、87.88%,任意兩組間比較均 P<0.01。PP-NPC和PM-NPC之間比較亦具有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.039)
　　VEGF表達于癌細胞和部分上皮細胞的胞漿,呈淡黃色。VEGF在CN、P-NPC和M-NPC中的陽性率分別為16.67%、53.62%、75.00%,P-NPC和M-NPC都顯著高于CN(P<0.01), M-NPC高于P-NPC(P=0.033)。進一步比較PP-NPC和

12、PM-NPC,亦具有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.041)。
　　VEGF-C表達于癌細胞和部分上皮細胞的胞漿,呈黃色。在CN、P-NPC和M-NPC中的陽性表達率分別為20.00%、45.59%、66.67%,P-NPC與 M-NPC陽性率明顯高于 CN(P=0.016和P<0.01),M-NPC高于P-NPC(P=0.040)。配對比較PP-NPC和PM-NPC,差別亦具有顯著性(P=0.035)。
　　CD34標記微血管密度值從

13、CN、P-NPC至M-NPC逐步增大,分別為7.70±4.52、13.55±7.95、15.10±5.92,P-NPC和M-NPC中的微血管數(shù)明顯多于CN(P<0.01),但P-NPC至M-NPC間無統(tǒng)計學(xué)差異。PP-NPC和PM-NPC間微血管密度分別為15.20±8.93、15.03±5.96,差別亦無顯著性(P>0.05)
　　4.原位雜交結(jié)果
　　EMMPRIN mRNA主要表達于癌細胞胞漿,在檢測的47例鼻咽癌中,

14、IHC和ISH兩種方法檢測到的EMMPRIN的表達情況具有一致性(Kappa值=0.319,P<0.01)。
　　5.各測量指標的相關(guān)性分析
　　在NPC中,EMMPRIN與VEGF、VEGF-C、PCNA的表達情況均具有一定的相關(guān)性,rs值分別為0.352、0.292和0.266(P<0.01);EMMPRIN與MMP-3亦具有相關(guān)性,rs值為0.223(P<0.05)。其他指標除PCNA與MMP-3及PCNA與VEGF-

15、C間無相關(guān)性外,兩兩比較均具有相關(guān)性(P<0.05).
　　在NPC中,MI在高表達EMMPRIN標本為3.99±2.35,明顯高于低表達者3.15±1.85(P=0.047),MI在PCNA陽性標本值明顯大于陰性標本,高表達PCNA的標本明顯大于低表達者(P<0.050),而VEGF-C陰性與陽性之間、高表達與低表達之間比較,MI無明顯差別(P>0.050)。
　　在NPC標本中,微血管密度在EMMPRIN、VEGF及VE

16、GF-C的陽性標本與陰性標本、高表達標本與低表達標本之間無差異(P>0.05)
　　M-NPC中 EMMPRIN和VEGF-C同時表達的陽性率為55.56%,明顯高于P-NPC(P=0.032),其同時不表達的陰性率為8.33%,明顯低于P-NPC(P=0.020);PM-NPC中EMMPRIN和VEGF-C同時表達的陽性率為53.13%,明顯高于PP-NPC(P=0.021),其同時不表達的陰性率為9.37%,明顯低于PP-NP

17、C(P=0.008)。
　　結(jié)論:
　　1.鼻咽癌細胞核形態(tài)在癌轉(zhuǎn)移前后沒有發(fā)生改變。
　　2.EMMPRIN是鼻咽癌重要的惡性表型,它的高表達可能在鼻咽癌增生及頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的形成和(或)發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用,但不參與鼻咽癌微血管的生成。
　　3.MMP-3在鼻咽癌高表達,可能受EMMPRIN誘導(dǎo),促進鼻咽癌轉(zhuǎn)移。
　　4.VEGF-C對鼻咽癌細胞增生和微血管生成沒有直接促進作用,但可能參與頸部淋巴結(jié)