細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C在鼻咽癌中的表達(dá)及其意義.pdf

1、背景與目的:
　　鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我國(guó)南方的一種高發(fā)腫瘤,具有易浸潤(rùn)性和高轉(zhuǎn)移性的特點(diǎn),常早期發(fā)生頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,據(jù)統(tǒng)計(jì),有45％~50%的患者是以頸部腫塊為首發(fā)癥狀。因此,研究鼻咽癌的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移機(jī)制對(duì)我國(guó)鼻咽癌的防治將具有重要意義。細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子(Extracellular matrix metalloproteinases inducer, EMMPRIN)是免

2、疫球蛋白超家族的一個(gè)成員,在許多腫瘤高表達(dá),它可通過(guò)上調(diào)透明質(zhì)酸的產(chǎn)量來(lái)促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng),通過(guò)誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的產(chǎn)生來(lái)促進(jìn)腫瘤血管的增生,也能通過(guò)刺激間質(zhì)細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞本身產(chǎn)生多種基質(zhì)金屬蛋白酶來(lái)降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì),從而促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(Vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)

3、是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的促進(jìn)淋巴管生長(zhǎng)的因子,參與多種腫瘤的淋巴管增生和淋巴道轉(zhuǎn)移,而其在鼻咽癌的研究較少,有報(bào)道表明 VEGF-C的表達(dá)與鼻咽癌細(xì)胞的增生和轉(zhuǎn)移成正相關(guān)。總之,EMMPRIN和VEGF-C高表達(dá)是許多腫瘤的惡性表型,它們能夠促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)、腫瘤血管和淋巴管增生及腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移,而這些作用都可能呈現(xiàn)在鼻咽癌演進(jìn)過(guò)程中。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組化、原位雜交、圖像分析等技術(shù)對(duì) EMMPRIN、VEGF-C及相關(guān)指標(biāo)在鼻咽癌中的表達(dá)情況進(jìn)行檢

4、測(cè),探討它們?cè)诒茄拾┥L(zhǎng)、血管生成及頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用,為鼻咽癌的防治提供理論基礎(chǔ)。
　　材料與方法:
　　1.研究對(duì)象收集汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院及汕頭市中心醫(yī)院1996~2005年間進(jìn)行鼻咽部和/或頸部淋巴結(jié)活檢的組織標(biāo)本,經(jīng)臨床病理診斷,將標(biāo)本分成三組:30例鼻咽粘膜慢性炎癥(Chronic nasopharyngitis, CN),71例鼻咽癌原發(fā)灶(Primary nasopharyngeal carci

5、noma, P-NPC),36例鼻咽癌頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶(Metastatic nasopharyngeal carcinoma, M-NPC)。在鼻咽癌原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中,有34對(duì)來(lái)自同一病人(從2868例鼻咽癌病例中篩選而來(lái)),即配對(duì)組鼻咽癌原發(fā)灶(Paired primary nasopharyngeal carcinoma, PP-NPC)和配對(duì)組鼻咽癌轉(zhuǎn)移灶(Paired metastatic nasopharyngeal car

6、cinoma, PM-NPC)。
　　2.HE染色作有絲分裂指數(shù)計(jì)數(shù)。
　　3.圖像分析法對(duì)組織切片進(jìn)行蘇木素染色,利用Leica Qwin standard Y2.8圖象分析系統(tǒng)對(duì)標(biāo)本細(xì)胞核進(jìn)行形態(tài)定量。
　　4.免疫組織化學(xué)染色 Envision Labelled Peroxidase System(ELPS)二步法檢測(cè)石蠟組織切片中EMMPRIN、 MMP-3、VEGF、VEGF-C、CD34及PCNA蛋白的表達(dá)

7、情況。
　　5.原位雜交從免疫組化剩余標(biāo)本中選取組織結(jié)構(gòu)完整的標(biāo)本47例,其中包括P-NPC31例、M-NPC16例,檢測(cè)組織切片中EMMPRIN mRNA的表達(dá)情況,與免疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)行一致性分析。
　　結(jié)果:
　　1.有絲分裂指數(shù)計(jì)數(shù)
　　鼻咽慢性炎癥、鼻咽癌原發(fā)灶及鼻咽癌轉(zhuǎn)移灶中有絲分裂指數(shù)(Mitotic index, MI)分別為0.26±0.44,3.00±1.66,4.70±2.53,各組間差異均

8、有高度顯著性(P<0.01);同一病人鼻咽癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶MI分別為2.27±1.01,4.65±2.68,差異亦具有高度顯著性(P<0.001)。
　　2.形態(tài)定量結(jié)果
　　與鼻咽慢性炎癥比較,鼻咽癌原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中癌細(xì)胞細(xì)胞核的面積、周長(zhǎng)、長(zhǎng)軸、短軸均顯著增加(P<0.01),但圓度無(wú)差別。但鼻咽癌原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶之間、配對(duì)組鼻咽癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶之間細(xì)胞核形態(tài)無(wú)差別。
　　3.免疫組化結(jié)果
　　EMMPRIN蛋

9、白陽(yáng)性產(chǎn)物主要表達(dá)于癌細(xì)胞和部分上皮細(xì)胞的胞漿或胞膜,呈棕黃色顆粒狀。EMMPRIN在NPC中總體陽(yáng)性率為67.29%,明顯高于CN的陽(yáng)性率30.00%(P<0.001)。EMMPRIN在CN、P-NPC和M-NPC中的表達(dá)逐步增高,P-NPC和M-NPC陽(yáng)性率顯著高于CN組(P<0.01),M-NPC陽(yáng)性率80.56%顯著高于P-NPC60.56%(P=0.037)。另外,配對(duì)比較PP-NPC與PM-NPC,差異亦具顯著性(P=0.0

10、12)。
　　MMP-3的陽(yáng)性信號(hào)主要位于癌細(xì)胞和部分上皮細(xì)胞的胞漿,個(gè)別淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞胞漿亦呈陽(yáng)性。MMP-3在P-NPC和M-NPC中的陽(yáng)性率分別為35.21%、44.44%,明顯高于CN13.33%(P=0.026和0.005),但在P-NPC和M-NPC中的表達(dá)無(wú)差異,PP-NPC和PM-NPC之間亦無(wú)差異。
　　PCNA陽(yáng)性產(chǎn)物位于癌細(xì)胞和部分上皮細(xì)胞的胞核,呈棕褐色。PCNA在CN、P-NPC和M-NPC中

11、的陽(yáng)性率分別為24.14%、59.38%、87.88%,任意兩組間比較均 P<0.01。PP-NPC和PM-NPC之間比較亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.039)
　　VEGF表達(dá)于癌細(xì)胞和部分上皮細(xì)胞的胞漿,呈淡黃色。VEGF在CN、P-NPC和M-NPC中的陽(yáng)性率分別為16.67%、53.62%、75.00%,P-NPC和M-NPC都顯著高于CN(P<0.01), M-NPC高于P-NPC(P=0.033)。進(jìn)一步比較PP-NPC和

12、PM-NPC,亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.041)。
　　VEGF-C表達(dá)于癌細(xì)胞和部分上皮細(xì)胞的胞漿,呈黃色。在CN、P-NPC和M-NPC中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為20.00%、45.59%、66.67%,P-NPC與 M-NPC陽(yáng)性率明顯高于 CN(P=0.016和P<0.01),M-NPC高于P-NPC(P=0.040)。配對(duì)比較PP-NPC和PM-NPC,差別亦具有顯著性(P=0.035)。
　　CD34標(biāo)記微血管密度值從

13、CN、P-NPC至M-NPC逐步增大,分別為7.70±4.52、13.55±7.95、15.10±5.92,P-NPC和M-NPC中的微血管數(shù)明顯多于CN(P<0.01),但P-NPC至M-NPC間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。PP-NPC和PM-NPC間微血管密度分別為15.20±8.93、15.03±5.96,差別亦無(wú)顯著性(P>0.05)
　　4.原位雜交結(jié)果
　　EMMPRIN mRNA主要表達(dá)于癌細(xì)胞胞漿,在檢測(cè)的47例鼻咽癌中,

14、IHC和ISH兩種方法檢測(cè)到的EMMPRIN的表達(dá)情況具有一致性(Kappa值=0.319,P<0.01)。
　　5.各測(cè)量指標(biāo)的相關(guān)性分析
　　在NPC中,EMMPRIN與VEGF、VEGF-C、PCNA的表達(dá)情況均具有一定的相關(guān)性,rs值分別為0.352、0.292和0.266(P<0.01);EMMPRIN與MMP-3亦具有相關(guān)性,rs值為0.223(P<0.05)。其他指標(biāo)除PCNA與MMP-3及PCNA與VEGF-

15、C間無(wú)相關(guān)性外,兩兩比較均具有相關(guān)性(P<0.05).
　　在NPC中,MI在高表達(dá)EMMPRIN標(biāo)本為3.99±2.35,明顯高于低表達(dá)者3.15±1.85(P=0.047),MI在PCNA陽(yáng)性標(biāo)本值明顯大于陰性標(biāo)本,高表達(dá)PCNA的標(biāo)本明顯大于低表達(dá)者(P<0.050),而VEGF-C陰性與陽(yáng)性之間、高表達(dá)與低表達(dá)之間比較,MI無(wú)明顯差別(P>0.050)。
　　在NPC標(biāo)本中,微血管密度在EMMPRIN、VEGF及VE

16、GF-C的陽(yáng)性標(biāo)本與陰性標(biāo)本、高表達(dá)標(biāo)本與低表達(dá)標(biāo)本之間無(wú)差異(P>0.05)
　　M-NPC中 EMMPRIN和VEGF-C同時(shí)表達(dá)的陽(yáng)性率為55.56%,明顯高于P-NPC(P=0.032),其同時(shí)不表達(dá)的陰性率為8.33%,明顯低于P-NPC(P=0.020);PM-NPC中EMMPRIN和VEGF-C同時(shí)表達(dá)的陽(yáng)性率為53.13%,明顯高于PP-NPC(P=0.021),其同時(shí)不表達(dá)的陰性率為9.37%,明顯低于PP-NP

17、C(P=0.008)。
　　結(jié)論:
　　1.鼻咽癌細(xì)胞核形態(tài)在癌轉(zhuǎn)移前后沒(méi)有發(fā)生改變。
　　2.EMMPRIN是鼻咽癌重要的惡性表型,它的高表達(dá)可能在鼻咽癌增生及頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的形成和(或)發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用,但不參與鼻咽癌微血管的生成。
　　3.MMP-3在鼻咽癌高表達(dá),可能受EMMPRIN誘導(dǎo),促進(jìn)鼻咽癌轉(zhuǎn)移。
　　4.VEGF-C對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增生和微血管生成沒(méi)有直接促進(jìn)作用,但可能參與頸部淋巴結(jié)