水稻瘤矮病毒P8、Pns10基因的原核表達(dá)及生物信息學(xué)分析.pdf

1、為了深入研究水稻瘤矮病毒(Ricegalldwarfvirus，RGDV)P8、Pns10蛋白的功能，本文對(duì)RGDVP8、Pns10蛋白進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，并開(kāi)展了P8、Pns10蛋白的原核表達(dá)及抗血清制備。 通過(guò)RT-PCR技術(shù)成功地?cái)U(kuò)增到RGDV中國(guó)廣東信宜分離物(RGDV-C)P8、Pns10基因，并克隆到pMD18T載體上，雙酶切重組質(zhì)粒后，分別將目的片段轉(zhuǎn)入pGEX-4T-1表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21E.coli

2、(DE3)，篩選獲得陽(yáng)性重組子pGTP8、pGTPns10，序列測(cè)定表明目的基因準(zhǔn)確地插入到表達(dá)載體的BamHI/XhoI位點(diǎn)。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)分別表達(dá)出74kD、62kD的融合蛋白，SDS-PAGE分析顯示表達(dá)產(chǎn)物的分子量與預(yù)期的pGTP8融合蛋白、pGTPns10融合蛋白分子量相符。將獲得的pGTP8、pGTPns10融合蛋白免疫大耳白兔制備了?；钥寡?，間接ELISA測(cè)定P8、Pns10抗血清效價(jià)分別為1：9600、1：8192，

3、Western-blotting印跡分析表明所制備的P8、Pns10抗血清特異性強(qiáng)。 借助生物學(xué)軟件及相關(guān)在線分析工具對(duì)測(cè)序完成的RGDVP8、Pns10基因進(jìn)行基于氨基酸序列的生物信息學(xué)分析，包括蛋白質(zhì)理化特性、蛋白質(zhì)功能域、基序(Motif)、空間結(jié)構(gòu)等，分析表明除P8蛋白含有一個(gè)26個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的跨膜區(qū)外，兩個(gè)蛋白均無(wú)信號(hào)肽、卷曲螺旋等功能區(qū)特征。功能域分析表明P8蛋白是Phytoreo_P8家族中的一個(gè)成員，該家族蛋白的