多個(gè)冠心病易感基因的基因多態(tài)性和DNA甲基化研究.pdf

1、目的：本次研究是通過薈萃分析及對寧波地區(qū)漢族人群進(jìn)行候選基因多態(tài)性位點(diǎn)的檢測，探討這些多態(tài)性位點(diǎn)與冠心病的相關(guān)性；通過對易感基因的DNA甲基化分析，探究DNA甲基化變化與冠心病的關(guān)系。
　　方法：運(yùn)用Revman5.0軟件對HFE和APOA5基因的多個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行薈萃分析；收集經(jīng)冠脈造影判斷的290名冠心病人、198例非冠心病對照以及331例健康對照組人員，采用MassARRAY飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)對20個(gè)候選的基因多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行檢

2、測；挑選年齡、性別、臨床指標(biāo)都相近的冠心病組和對照組各36名(18名男性、18名女性)，采用焦磷酸測序方法對 PLA2G7、CDKN2B、GCK基因的CpG島進(jìn)行DNA甲基化檢測。
　　結(jié)果：(1)薈萃分析：在歐洲人群中，rs662799-G能增加77％的患病風(fēng)險(xiǎn)(P<0.00001, OR=1.77,95% CI=1.42-2.20)，在亞洲人群中能增加38%的患病風(fēng)險(xiǎn)(P<0.00001, OR=1.38,95% CI=1.2

3、5-1.52)。在高加索人群中rs1799945-G能增加6%患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)(P=0.02, OR=1.06,95% CI=1.01-1.11)。但在中國人群中沒有風(fēng)險(xiǎn)性(P=0.77, OR=0.91,95% CI=0.50-1.68)。
　　(2)病例對照研究：Rs7756935-C對冠心病的形成有保護(hù)作用(P=0.03, OR(95%CI)=0.68(0.48-0.97))，而rs964184-G(P=0.04, OR(95

4、%CI)=1.40(1.01-1.93))和rs662799-G(P=0.03, OR(95%CI)=1.42(1.04-1.95))增加了冠心病的患病風(fēng)險(xiǎn)。在男性中，rs7528419(CELSR2)突變是冠心病的保護(hù)因素，女性中，rs964184(ZNF259)和rs662799(APOA5)突變是風(fēng)險(xiǎn)因素，位于PLA2G7的兩個(gè)SNP(rs7756935和rs1805017)的突變均起保護(hù)作用。
　　(3) TRIB1基因r

5、s17321515多態(tài)性與冠心病無關(guān)。在CHD患者組，AA基因型攜帶者的甘油三酯(triglyceride，TG)水平(1.76±1.04)比 AG基因型攜帶者的TG水平(2.09±1.07)低(P<0.05),而其低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)水平(2.52±1.48)明顯比攜帶AG基因型的患者(2.14±1.08)的LDL水平高(P<0.05)。而在非CHD對照組，AA攜帶者(2.22±1.1

6、4)、AG攜帶者(2.03±1.09)的TG水平均要比 GG攜帶者(1.68±1.03)顯著高(P<0.05)。
　　(4) ABCG5/ABCG8的rs4299376多態(tài)性與冠心病無關(guān)。在女性中，冠心病患者的TG及總膽固醇(TC)水平比非冠心病對照的明顯高(CHD組 TG：2.23±1.05，非 CHD組TG：1.84±1.03，P=0.01;CHD組TC：4.79±1.17，非CHD組TC：4.36±1.03，P=0.01)。

7、將年齡進(jìn)行分組后，在≥60歲的分組中，冠心病患者的高密度脂蛋白(HDL)水平比非冠心病對照低(CHD組：1.09±0.23，非CHD組：1.16±0.25，P=0.03)。
　　(5)CHD組PLA2G7基因的甲基化水平比對照組高(6.41±2.62vs4.98±3.06，P=0.026)，在性別中差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.226)。男性的CDKN2B甲基化水平比女性要高(8.07±2.76vs6.02±2.26，P=0.007

8、)，且CHD組和對照組相比也有較高的CDKN2B甲基化水平(7.66±3.02vs6.43±2.23，P=0.043)。而GCK基因CpG2-4及平均甲基化水平在CHD組中都比對照組中低，且都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PLA2G7和CDKN2B在病例對照比較時(shí)發(fā)現(xiàn)女性中有較顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.003,0.009)。女性中病例組的甲基化水平要比對照組高，而男性中差異不大。
　　(6)PLA2G7和CDKN2B的甲基化水平在

9、男性中與年齡呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(PLA2G7: r=-0.365, P=0.037;CDKN2B:r=-0.370, P=0.034),而女性中與年齡呈正相關(guān)關(guān)系(PLA2G7: r=0.373, P=0.035;CDKN2B:r=0.406, P=0.021)。GCK基因的甲基化水平與年齡沒有關(guān)系(P>0.05)。對年齡按照60歲為界進(jìn)行分組，發(fā)現(xiàn)在60歲以下人群中，甲基化程度與男女均沒有顯著相關(guān)性(P>0.05),但是在60歲以上人群中，

10、女性的甲基化程度與年齡有顯著相關(guān)性(PLA2G7：r=0.437, P=0.033;CDKN2B：r=0.579, P=0.007)。而男性60歲以上人群中，僅PLA2G7的甲基化程度與年齡有顯著相關(guān)性(PLA2G7：r=-0.509, P=0.013)。
　　結(jié)論：(1)薈萃分析：rs662799(APOA5)突變是冠心病的易感基因位點(diǎn)。rs1799945(HFE)突變在高加索人群中是冠心病的風(fēng)險(xiǎn)因素，但在中國人群中沒有風(fēng)險(xiǎn)性。

11、研究基因多態(tài)性位點(diǎn)與冠心病的關(guān)系的薈萃分析已發(fā)表于Molecular Medicine Reports(IF=1.17)及 Gene(IF=2.2)。
　　(2)病例對照研究：在男性中，rs7528419(CELSR2)突變是冠心病的保護(hù)因素，女性中，rs964184(ZNF259)和rs662799(APOA5)突變是風(fēng)險(xiǎn)因素，位于PLA2G7的兩個(gè)SNP(rs7756935和rs1805017)的突變均起保護(hù)作用。該病例對照研

12、究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果已發(fā)表于Experimental and therapeutic medicine(IF=0.34).
　　(3) TRIB1基因rs17321515多態(tài)性與冠心病無顯著相關(guān)性。在CHD患者組，攜帶AA基因型的患者具有較低的TG水平和較高的LDL水平，非CHD組攜帶A等位基因的對照者TG水平較高。ABCG5/ABCG8基因 rs4299376多態(tài)性與冠心病無關(guān)。冠心病組的女性比非冠心病組的女性具有更高的TC和TG水平。

13、60歲以上的冠心病患者比非冠心病患者具有較低的HDL水平?；蚨鄳B(tài)性與脂質(zhì)水平的研究結(jié)果一項(xiàng)已發(fā)表于《中國科技論文在線精品論文》，另一篇文章已被《第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)》接收。
　　(4) PLA2G7和 CDKN2B啟動子區(qū)的高甲基化會增加冠心病的風(fēng)險(xiǎn)。男性的CDKN2B甲基化水平比女性要高。而GCK基因的甲基化水平在CHD組中比對照組中低。PLA2G7和CDKN2B在分性別病例對照比較時(shí)發(fā)現(xiàn)兩個(gè)基因在女性中均有較顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。<

14、br>　　(5) PLA2G7和CDKN2B的甲基化水平在男性中與年齡呈負(fù)相關(guān)，而女性中呈正相關(guān)。在60歲以上人群中，女性的甲基化程度與年齡有顯著正相關(guān)性，男性僅 PLA2G7的甲基化程度與年齡有顯著負(fù)相關(guān)性。關(guān)于DNA甲基化與冠心病關(guān)系的研究中，文章已發(fā)表于Plos One(IF=3.73)及BioMed Research International(journal of biomedicine and biotechnology,