CXCL16基因多態(tài)性與冠心病遺傳易感性的研究.pdf

1、研究背景及目的
　　背景：冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┦菄乐赝{人類健康和生命的疾病之一。CXC趨化因子配體16（CXCL16）是新近發(fā)現(xiàn)的趨化因子CXC家族的一個新成員，它以可溶性及跨膜表達兩種形式存在。研究發(fā)現(xiàn)，CXCL16具有趨化因子、清道夫受體及粘附分子等三種分子的功能，提示CXCL16/SR-PSOX可能在動脈粥樣硬化中起重要作用。
　　最初的體外試驗顯示，在人及鼠動脈粥樣病變中均可檢測到CXCL16的高表達

2、。隨后的體內試驗發(fā)現(xiàn)，CXCL16/SR-PSOX可介導T細胞粘附到內皮，驅使T細胞遷移，刺激細胞增殖，促發(fā)平滑肌細胞的炎癥表型，介導巨噬細胞攝入氧化低密度脂蛋白。所有這些效應均被認為是致動脈粥樣硬化作用的。令人不解的是，在鼠動脈粥樣動物模型中發(fā)現(xiàn)，CXCL16缺失能增加動脈粥樣硬化的病損大小，提示其具有抗動脈粥樣硬化作用。但它唯一的受體卻具有致動脈粥樣硬化作用。另外，對循環(huán)水平CXCL16/SR-PSOX檢測發(fā)現(xiàn)，血漿CXCL16濃度

3、與冠心病的關系也是有爭議的，既有陽性相關、陰性相關，還有研究顯示與冠心病無關，新近還有研究顯示其與急性冠脈綜合征患者長期死亡率相關。至此，CXCL16/SR-PSOX在動脈粥樣硬化中起何種作用，是致病因素、還是其生物學標志，甚至是抗動脈粥樣作用目前仍未完全清楚。
　　CXCL16的基因變異可能會調節(jié)其表達水平及蛋白功能。一項研究顯示位于CXCL16第4外顯子的一個單核苷酸多態(tài)與雖與冠心病無關，但與冠心病患者的冠脈嚴重性有關。但該研

4、究僅研究了一個多態(tài)，顯然不足以完整的反映CXCL16基因變異與冠心病的相關性。并且該研究樣本量較小，且尚無中國漢族人這方面的資料。
　　目的：首先，我們以HapMap數(shù)據(jù)庫為基礎選擇CXCL16基因的標簽SNPs，在一大型病例-對照研究中分析CXCL16的常見多態(tài)與冠心病的相關性。其次，在亞組病例中檢測血漿CXCL16水平，探討其與CXCL16基因型之間的關系。方法：（1）研究對象自2006年6月～2009年3月，從沈陽軍區(qū)總醫(yī)院

5、心內科病房選取1176例冠心病患者為病例組，850例冠脈造影陰性者為對照組。所有入選者年齡29歲～75歲，均為漢族，無血緣關系，來自于中國東北地區(qū)，在我院接受冠狀動脈造影檢查。亞組研究對象選自2008年5月～2009年3月于原研究隊列，由160例首次發(fā)作的急性心肌梗死和160例冠脈造影完全正常者組成。亞組中病例組和對照組在年齡(≤5歲)、性別、吸煙、高血壓和糖尿病等方面相匹配。（2）標簽SNPs的選擇及基因型檢測基于HapMap數(shù)據(jù)庫中

6、漢族人群數(shù)據(jù)庫，運用Tagger程序，以r2≥0.80和少見等位基因頻率≥5％為參數(shù)，共選擇出5個標簽SNPs。以PCR-RFLP法檢測rs2277680基因型，以PCR-直接測序法檢測rs1051009、rs3744700、rs2304973和rs2250333等SNPs的基因型。(3)血漿CXCL16水平檢測急性心肌梗死組于發(fā)病12h內（1h-12h，平均5.3h）入院即刻抽取靜脈血，對照組于行冠脈造影后次日清晨采集空腹靜脈血。將處

7、理好的血漿貯藏于-80℃低溫冰箱保存，標本收集齊全后統(tǒng)一采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定CXCL16濃度。
　　結果：(1)研究對象的臨床特征兩組受試者在年齡、性別分布，吸煙、高血壓和糖尿病比例，體重指數(shù)、LDL-C、HDL-C、甘油三脂和空腹血糖水平等方面均有顯著差異。但亞組研究對象的各臨床指標在兩組間無顯著差異。(2)CXCL16基因多態(tài)性與冠心病的相關性所研究CXCL16各SNPs的基因型分布在病例組和對照組均符合H

8、ardy-Weinberg平衡。rs3744700的基因型分布和等位基因頻率在兩組間有顯著差別(P=0.001andP<0.001,respectively)，經Bonferroni糾正多重檢驗后，差異仍具有顯著性。進一步多元回歸logistic分析糾正各心血管危險因素后，GG基因型者發(fā)生冠心病的風險約是T等位基因攜帶者(GT+TT)的1.8倍(糾正后OR,1.77;95％CI,1.28-2.43;P<0.001)。其余4個SNPs的基

9、因型分布及等位基因頻率在兩組間無顯著差別。進一步分析未發(fā)現(xiàn)CXCL16各SNPs與冠脈狹窄的嚴重程度相關，也未發(fā)現(xiàn)與771例未服用任何降酯藥物的對照組受試者的血脂譜(TG,TC,LDL-C,andHDL-C)存在相關性。(3)CXCL16基因第4內含子調節(jié)性功能元件的發(fā)掘利用BerkeleyDrosophilaGenomeProject提供的網(wǎng)上剪切位點預測程序。我們發(fā)現(xiàn)第4內含子區(qū)域有一個剪接受體位點，其可信性評分達到1.00，并且，

10、rs3744700位于該位點上游僅61bp處。另外我們還發(fā)現(xiàn)，第4內含子區(qū)域含有多個潛在的功能調節(jié)元件，rs3744700正好位于GATA中，T>G極有可能影響其功能。(4)亞組人群的CXCL16血漿水平及其與rs3744700的相關性急性心?；颊咂溲獫{CXCL16水平顯著高于對照組(P<0.01)。但與急性心?；颊卟∽儑乐爻潭葻o關。在對照組和急性心梗組，GG型者其血漿CXCL16水平均顯著高于T等位基因攜帶者(GT+TT)(分別為P=