CXCL16基因多態(tài)性與冠心病遺傳易感性的研究.pdf

1、研究背景及目的
　　背景：冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┦菄?yán)重威脅人類健康和生命的疾病之一。CXC趨化因子配體16（CXCL16）是新近發(fā)現(xiàn)的趨化因子CXC家族的一個(gè)新成員，它以可溶性及跨膜表達(dá)兩種形式存在。研究發(fā)現(xiàn)，CXCL16具有趨化因子、清道夫受體及粘附分子等三種分子的功能，提示CXCL16/SR-PSOX可能在動(dòng)脈粥樣硬化中起重要作用。
　　最初的體外試驗(yàn)顯示，在人及鼠動(dòng)脈粥樣病變中均可檢測(cè)到CXCL16的高表達(dá)

2、。隨后的體內(nèi)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CXCL16/SR-PSOX可介導(dǎo)T細(xì)胞粘附到內(nèi)皮，驅(qū)使T細(xì)胞遷移，刺激細(xì)胞增殖，促發(fā)平滑肌細(xì)胞的炎癥表型，介導(dǎo)巨噬細(xì)胞攝入氧化低密度脂蛋白。所有這些效應(yīng)均被認(rèn)為是致動(dòng)脈粥樣硬化作用的。令人不解的是，在鼠動(dòng)脈粥樣動(dòng)物模型中發(fā)現(xiàn)，CXCL16缺失能增加動(dòng)脈粥樣硬化的病損大小，提示其具有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。但它唯一的受體卻具有致動(dòng)脈粥樣硬化作用。另外，對(duì)循環(huán)水平CXCL16/SR-PSOX檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，血漿CXCL16濃度

3、與冠心病的關(guān)系也是有爭(zhēng)議的，既有陽性相關(guān)、陰性相關(guān)，還有研究顯示與冠心病無關(guān)，新近還有研究顯示其與急性冠脈綜合征患者長(zhǎng)期死亡率相關(guān)。至此，CXCL16/SR-PSOX在動(dòng)脈粥樣硬化中起何種作用，是致病因素、還是其生物學(xué)標(biāo)志，甚至是抗動(dòng)脈粥樣作用目前仍未完全清楚。
　　CXCL16的基因變異可能會(huì)調(diào)節(jié)其表達(dá)水平及蛋白功能。一項(xiàng)研究顯示位于CXCL16第4外顯子的一個(gè)單核苷酸多態(tài)與雖與冠心病無關(guān)，但與冠心病患者的冠脈嚴(yán)重性有關(guān)。但該研

4、究?jī)H研究了一個(gè)多態(tài)，顯然不足以完整的反映CXCL16基因變異與冠心病的相關(guān)性。并且該研究樣本量較小，且尚無中國(guó)漢族人這方面的資料。
　　目的：首先，我們以HapMap數(shù)據(jù)庫(kù)為基礎(chǔ)選擇CXCL16基因的標(biāo)簽SNPs，在一大型病例-對(duì)照研究中分析CXCL16的常見多態(tài)與冠心病的相關(guān)性。其次，在亞組病例中檢測(cè)血漿CXCL16水平，探討其與CXCL16基因型之間的關(guān)系。方法：（1）研究對(duì)象自2006年6月～2009年3月，從沈陽軍區(qū)總醫(yī)院

5、心內(nèi)科病房選取1176例冠心病患者為病例組，850例冠脈造影陰性者為對(duì)照組。所有入選者年齡29歲～75歲，均為漢族，無血緣關(guān)系，來自于中國(guó)東北地區(qū)，在我院接受冠狀動(dòng)脈造影檢查。亞組研究對(duì)象選自2008年5月～2009年3月于原研究隊(duì)列，由160例首次發(fā)作的急性心肌梗死和160例冠脈造影完全正常者組成。亞組中病例組和對(duì)照組在年齡(≤5歲)、性別、吸煙、高血壓和糖尿病等方面相匹配。（2）標(biāo)簽SNPs的選擇及基因型檢測(cè)基于HapMap數(shù)據(jù)庫(kù)中

6、漢族人群數(shù)據(jù)庫(kù)，運(yùn)用Tagger程序，以r2≥0.80和少見等位基因頻率≥5％為參數(shù)，共選擇出5個(gè)標(biāo)簽SNPs。以PCR-RFLP法檢測(cè)rs2277680基因型，以PCR-直接測(cè)序法檢測(cè)rs1051009、rs3744700、rs2304973和rs2250333等SNPs的基因型。(3)血漿CXCL16水平檢測(cè)急性心肌梗死組于發(fā)病12h內(nèi)（1h-12h，平均5.3h）入院即刻抽取靜脈血，對(duì)照組于行冠脈造影后次日清晨采集空腹靜脈血。將處

7、理好的血漿貯藏于-80℃低溫冰箱保存，標(biāo)本收集齊全后統(tǒng)一采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)測(cè)定CXCL16濃度。
　　結(jié)果：(1)研究對(duì)象的臨床特征兩組受試者在年齡、性別分布，吸煙、高血壓和糖尿病比例，體重指數(shù)、LDL-C、HDL-C、甘油三脂和空腹血糖水平等方面均有顯著差異。但亞組研究對(duì)象的各臨床指標(biāo)在兩組間無顯著差異。(2)CXCL16基因多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性所研究CXCL16各SNPs的基因型分布在病例組和對(duì)照組均符合H

8、ardy-Weinberg平衡。rs3744700的基因型分布和等位基因頻率在兩組間有顯著差別(P=0.001andP<0.001,respectively)，經(jīng)Bonferroni糾正多重檢驗(yàn)后，差異仍具有顯著性。進(jìn)一步多元回歸logistic分析糾正各心血管危險(xiǎn)因素后，GG基因型者發(fā)生冠心病的風(fēng)險(xiǎn)約是T等位基因攜帶者(GT+TT)的1.8倍(糾正后OR,1.77;95％CI,1.28-2.43;P<0.001)。其余4個(gè)SNPs的基

9、因型分布及等位基因頻率在兩組間無顯著差別。進(jìn)一步分析未發(fā)現(xiàn)CXCL16各SNPs與冠脈狹窄的嚴(yán)重程度相關(guān)，也未發(fā)現(xiàn)與771例未服用任何降酯藥物的對(duì)照組受試者的血脂譜(TG,TC,LDL-C,andHDL-C)存在相關(guān)性。(3)CXCL16基因第4內(nèi)含子調(diào)節(jié)性功能元件的發(fā)掘利用BerkeleyDrosophilaGenomeProject提供的網(wǎng)上剪切位點(diǎn)預(yù)測(cè)程序。我們發(fā)現(xiàn)第4內(nèi)含子區(qū)域有一個(gè)剪接受體位點(diǎn)，其可信性評(píng)分達(dá)到1.00，并且，

10、rs3744700位于該位點(diǎn)上游僅61bp處。另外我們還發(fā)現(xiàn)，第4內(nèi)含子區(qū)域含有多個(gè)潛在的功能調(diào)節(jié)元件，rs3744700正好位于GATA中，T>G極有可能影響其功能。(4)亞組人群的CXCL16血漿水平及其與rs3744700的相關(guān)性急性心梗患者其血漿CXCL16水平顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。但與急性心?；颊卟∽儑?yán)重程度無關(guān)。在對(duì)照組和急性心梗組，GG型者其血漿CXCL16水平均顯著高于T等位基因攜帶者(GT+TT)(分別為P=