ATF抑制HBV的表達(dá)與拉米夫定的作用研究比較.pdf

1、目的:構(gòu)建特異性結(jié)合乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）X基因啟動子(X gene promoter，Xp)的鋅指蛋白(zinc finger protein，ZFP)，并與拉米夫定體外抗乙肝病毒效果進(jìn)行比較。
　　方法:1.設(shè)計(jì)特異性結(jié)合HBV Xp的ZFP并載入真核表達(dá)載體中，構(gòu)建重組質(zhì)粒nls-ZFP-kRAB-Flag(pcDNA3.1+，ATF)、nls-ZFP-Flag(pcDNA3.1+,ZFP

2、1)、nls-kRAB-Flag(pcDNA3.1+,ZFP2)。2.通過酶切、測序鑒定重組質(zhì)粒的正確性。3.Western blot和細(xì)胞免疫熒光技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒在HepG2.2.15細(xì)胞中的表達(dá)情況。4.將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞，設(shè)空白組（Blank組）、ATF組、ZFP1組、ZFP2組、空質(zhì)粒組（Empty vctor組）和拉米夫定組（3TC組），分別培養(yǎng)2d、6d、10d。用Western blot檢測各組HBx蛋

3、白的表達(dá)情況;FQ-PCR檢測各組HBV DNA復(fù)制的拷貝數(shù);ELASA技術(shù)檢測各組HepG2.2.15細(xì)胞上清中HBsAg和HBeAg的濃度。
　　結(jié)果:1:特異性的ATF能在HepG2.2.15細(xì)胞中表達(dá)。2:ATF和3TC對HepG2.2.15細(xì)胞中X蛋白和HBV DNA的表達(dá)在三個時間點(diǎn)具有明顯抑制作用(P＜0.05)，且ATF的抑制作用強(qiáng)于3TC(P＜0.05)，6d和10d作用強(qiáng)于2d(P＜0.05)。3:ATF組和3