大黃酸抑制高糖和血管緊張素Ⅱ誘導的大鼠近端腎小管上皮細胞肥大.pdf

1、目的:探討大黃酸(Rhein)對高糖和血管緊張素Ⅱ(angiotensin，Ang Ⅱ)誘導的大鼠近端腎小管上皮細胞肥大的影響及其影響途徑。 方法:實驗用SD大鼠。麻醉下，無菌分離單根近球小管并培養(yǎng)，以免疫細胞化學方法鑒定體外培養(yǎng)的腎小管上皮細胞。MTT比色法檢測體外培養(yǎng)的腎小管上皮細胞的增殖情況。在高糖(30mM)環(huán)境下用血管緊張素Ⅱ(10<'-7>M)刺激腎小管上皮細胞肥大。與此同時，加入不同濃度的大黃酸(30mg/L，15

2、mg/L，5mg/L)，作用24～72小時后檢測細胞體積，<'3>H-亮氨酸摻入量以及蛋白質(zhì)含量以觀察細胞肥大的變化。 結(jié)果:MTT比色法檢測體外培養(yǎng)的腎小管上皮細胞的增殖情況，各實驗組OD<,490>值分別與正常對照組比較，在含D-葡萄糖30mmol/L組，細胞培養(yǎng)24h與正常對照組比較出現(xiàn)細胞增殖受抑制(0.318±0.037 VS 0.340±0.035，P<0.05)，48h抑制程度增強(0.304±0.030 YS 0

3、.335±0.036，P<0.01)，72h顯著抑制(0.241±0.015 vs 0.317±0.027，P<0.01)。體外培養(yǎng)的腎小管上皮細胞經(jīng)高糖(30mM)培養(yǎng)72小時導致細胞體積明顯增大，表現(xiàn)為流式細胞儀檢測前向角散射光的強度明顯右移(122.84±2.93 VS 116.80±2.94，P<0.01)，<'3>H-亮氨酸摻入量(16905±1271.3 cpm/10<'5>cells VS7308.5±961.1cpm/1

4、0<'5>cells，P<0.01)及細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量(5.13±0.20μg/10<'5>cells VS 3.39±0.19μg/10<'5>cells，P<0.01)明顯增加。細胞經(jīng)高糖(30mM)+Ang Ⅱ(10<'-7>M)培養(yǎng)72小時導致細胞體積(127.59±2.36VS 122.84±2.93，P<0.05)，<'3>H-亮氨酸摻入量(23362±2182.5 cpm/10<'5>cellsVS 16905±1271.

5、3cpm/10<'5>cells,P<0.01)及細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量(7.06±0.24μg/10<'5>cells vS 5.13±0.20μg/10<'5>cells，P<0.01)較高糖(30mM)組增加。加入大黃酸處理72小時后，大黃酸(30mg/L)組較高糖(30mM)+Ang Ⅱ (10<'-7>M)培養(yǎng)組細胞體積減小(118.85±3.67 VS125.87±2.95, P<0.05)， <'3>H-亮氨酸摻入量明顯降低(1

6、0947±1007.3cpm/10<'5>cells VS 21849±2809.7cpm/10<'5>cells,P<0.01)，細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量明顯降低(4.38±0．45μg/10<'5>cells vs 7.16±0.20μg/10<'5>cells，P<0.01)。 結(jié)論:①高糖培養(yǎng)抑制腎小管上皮細胞增殖。 ②高糖培養(yǎng)誘導腎小管上皮細胞肥大。 ③血管緊張素Ⅱ增強高糖誘導的腎小管上皮細胞肥大作用。