壓力超負荷通過血管緊張素受體致內(nèi)皮祖細胞功能障礙的機制研究.pdf

1、目的:高血壓可導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能損傷,內(nèi)皮祖細胞(EPC)在血管內(nèi)皮修復(fù)中發(fā)揮重要作用。本研究探討AT受體在機械牽張致EPC功能變化中的作用,闡明高血壓時EPC功能變化,及參與血管內(nèi)皮損傷及修復(fù)的可能機制。
　　 方法:分離人臍血單個核細胞,在血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)存在條件下培養(yǎng)7～8d得到EPC。第一部分實驗將EPC隨機分對照組、AngⅡ組(10-6mol·L-1)、AngⅡ+替米沙

2、坦預(yù)處理組。半定量RT-PCR檢測EPC內(nèi)血管緊張素原(AGT)mRNA表達情況;血管緊張素受體AT1、AT2以及HIF1a、VEGF mRNA表達水平。第二部分實驗將EPC隨機分為對照組、機械牽張組、機械牽張+替米沙坦預(yù)處理組、機械牽張+ACEI預(yù)處理組。MTT法檢測EPC增殖功能;Transwell遷移小室測定EPC遷移功能。半定量RT-PCR檢測機械牽張對EPCs AT1、HIF1a、VEGF mRNA表達水平的影響。Wester

3、n Blot觀察機械牽張對ERK活性的影響。
　　 結(jié)果:1)人臍/tEEPC表達血管緊張素Ⅱ受體(Atl受體、AT2受體),不表達血管緊張素原(AGT)。
　　 2)外源性AngⅡ作用后,EPC的AT1受體、AT2受體mRNA表達量較對照組顯著增加(p＜0.05);替米沙坦干預(yù)后AT受體表達量明顯降低。
　　 3)外源性AngⅡ作用后,EPC的HIFla、VEGF mRNA表達量較對照組顯著降低(p＜0.05)

4、。用替米沙坦預(yù)處理細胞后再用AngⅡ刺激,與單純AngⅡ刺激組比較,HIF1a、VEGF mRNA表達明顯增加。
　　 4)機械牽張組EPC的增殖能力較對照組顯著減弱(p＜0.05)。
　　 5)替米沙坦預(yù)處理組EPC的遷移能力較機械牽張組顯著增強(p＜0.05)。
　　 6)機械牽張可降低EPC AT1 mRNA表達水平,替米沙坦預(yù)處理的細胞AT1mRNA表達水平與對照組相比無顯著差異。
　　 7)機械

5、牽張組EPC HIF1a、VEGF mRNA表達水平較對照組顯著降低(p＜0.05);用替米沙坦預(yù)處理細胞后再機械牽張刺激,與單純機械牽張組比較,HIF1a、VEGF mRNA表達明顯增加。
　　 8)機械牽張組EPC磷酸化ERK水平較對照組顯著升高(p＜0.05);用替米沙坦預(yù)處理細胞與單純機械牽張組比較,磷酸化ERK表達明顯降低。
　　 結(jié)論:人臍血EPC表達AT1受體,不表達血管緊張素原基因,機械牽張可不依賴Ang