TRPM7與壓力超負(fù)荷誘導(dǎo)的心血管重塑.pdf

1、第一部分 TRPM7與壓力超負(fù)荷誘導(dǎo)的血管外膜重塑
　　研究背景與目的：TRPM7是一種具有激酶活性的蛋白通道，它可以使自身或其底物磷酸化，并對(duì)Ca2+、Mg2+、Na+、K+等多種陽(yáng)離子具有通透性，其廣泛性的表達(dá)于心、腦、腎、血管等器官組織的細(xì)胞膜上，然而 TRPM7在血管疾病中的調(diào)控及其功能的研究甚少。我們前期研究發(fā)現(xiàn) TRPM7的下游底物 Annexin-1在自發(fā)性高血壓大鼠胸主動(dòng)脈外膜表達(dá)明顯降低，進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn) TRPM

2、7在主動(dòng)脈弓縮窄模型大鼠的頸動(dòng)脈外膜表達(dá)發(fā)生變化，在此基礎(chǔ)上本研究擬進(jìn)一步探索 TRPM7是否參與了壓力超負(fù)荷誘導(dǎo)的右側(cè)頸總動(dòng)脈血管外膜重塑過(guò)程的調(diào)控。
　　方法：20只雄性SD大鼠(270±20 g)隨機(jī)分成三組：假手術(shù)組、胸主動(dòng)脈弓縮窄（TAC）組（TAC組）、 TAC+2-Aminoethoxydiphenyl borate(2-APB)組（TAC+2-APB組）。通過(guò)部分縮窄無(wú)名動(dòng)脈與左頸總動(dòng)脈之間的主動(dòng)脈弓制備 TAC模

3、型。TAC+2-APB組造模前一小時(shí)開(kāi)始給藥，腹腔注射，每3天一次，2.5 mg/kg。術(shù)后2周將動(dòng)物處死，首先利用HE染色檢測(cè)右側(cè)頸總動(dòng)脈血管壁形態(tài)學(xué)改變，然后利用組織免疫熒光染色技術(shù)檢測(cè)血管外膜 TRPM7、TRPM7下游作用底物 Annexin-1、巨噬細(xì)胞標(biāo)記因子 CD68、單核細(xì)胞趨化因子-1（MCP-1）、肌成纖維細(xì)胞標(biāo)志蛋白平滑肌-22-α（SM-22-α）及Collage-I的表達(dá)。利用免疫印記技術(shù)，觀察血管外膜成纖維細(xì)

4、胞(AF)在巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)液刺激下TRPM7、Annexin-1及SM-22-α的表達(dá),同時(shí)分別加入2-APB、TRPM7 small interference RNA(SiRNA)后再檢測(cè)TRPM7、Annexin-1及SM-22-α的表達(dá)。
　　結(jié)果：發(fā)現(xiàn)在壓力超負(fù)荷狀態(tài)下，右側(cè)頸總動(dòng)脈血管壁增厚，尤其血管外膜增厚更為明顯。在右側(cè)頸總動(dòng)脈血管外膜 TRPM7表達(dá)顯著增加，同時(shí)伴有大量的巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，TRPM7下游作用底物An

5、nexin-1的表達(dá)降低。給予TRPM7抑制劑2-Aminoethoxydiphenyl borate(2-APB)處理后發(fā)現(xiàn)，血管外膜巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)程度、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、肌成纖維細(xì)胞標(biāo)志蛋白平滑肌 SM-22-α（SM-22-α）及Collage-I的表達(dá)均降低，而Annexin-1的表達(dá)增加。體外研究發(fā)現(xiàn)AF細(xì)胞在巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)液刺激下TRPM7及SM-22-α的表達(dá)增加，Annexin-1的表達(dá)降低，而經(jīng)2-A

6、PB、TRPM7SiRNA處理后，TRPM7及 SM-22-α的表達(dá)降低，Annexin-1的表達(dá)增加。
　　結(jié)論：TRPM7參與大鼠主動(dòng)脈弓縮窄模型中壓力超負(fù)荷誘導(dǎo)的右側(cè)頸總動(dòng)脈血管外膜重塑過(guò)程，其參與調(diào)節(jié)血管外膜重塑過(guò)程可能與巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)有關(guān)。
　　第二部分 TRPM7抑制劑對(duì)壓力超負(fù)荷大鼠心肌肥厚的影響
　　目的:研究瞬時(shí)受體電位通道 M7（TRPM7）抑制劑對(duì)壓力超負(fù)荷所致心肌肥厚及炎癥反應(yīng)的影響。
　

7、　方法:雄性 SD大鼠20只，隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組（n=6）、主動(dòng)脈弓縮窄組(TAC組)（n=7）、TAC+2-APB組（抑制劑組）（n=7）。通過(guò)在右側(cè)無(wú)名動(dòng)脈和左側(cè)頸總動(dòng)脈之間部分縮窄主動(dòng)脈弓而誘導(dǎo)大鼠心肌肥厚模型。假手術(shù)組操作同主動(dòng)脈弓縮窄組，但是不結(jié)扎。抑制劑組造模前一天開(kāi)始給藥，腹腔注射，每3天一次，2.5 mg/kg。造模2周后取各組大鼠左心室，將心肌樣本切片，蘇木素-伊紅染色觀察心肌形態(tài)學(xué)改變；Masson染色檢測(cè)心肌組