碳青霉烯類抗生素耐藥鮑曼不動桿菌耐藥機制及同源性研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩118頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、近年來非發(fā)酵菌在臨床分離的致病菌中呈增加趨勢,其中最主要菌種為不動桿菌和銅綠假單胞菌,不動桿菌中又以鮑曼不動桿菌最為常見。不動桿菌為條件致病菌,廣泛分布于水、土壤、醫(yī)院環(huán)境和人體的皮膚表面。目前,鮑曼不動桿菌已成為繼大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌之后的重要臨床分離菌。 近幾年來,多重耐藥鮑曼不動桿菌已經(jīng)在全球各地出現(xiàn)播散,甚至造成了爆發(fā)流行,并且伴隨著耐藥性的不斷上升。世界各地相繼報道了多重耐藥鮑曼不動桿菌的流行:歐洲

2、、北美、阿根廷、巴西、中國大陸、中國臺灣、中國香港、日本、韓國,甚至偏遠的西太平洋大西地島等。 碳青霉烯類抗生素對不動桿菌有較好的抗菌活性,是治療不動桿菌重癥感染的首選抗生素。近年來,有關碳青霉烯類抗生素耐藥不動桿菌已經(jīng)開始出現(xiàn)和流行。INSPEAR(the International Network for the Study and Prevention of Emerging Antimicrobial Resistanc

3、e)將不動桿菌中出現(xiàn)碳青霉烯類抗生素耐藥株稱之為全球性的標志性事件,呼吁進行正確的流行病學和微生物學干預。 碳青霉烯酶是指能夠水解至少一種碳青霉烯類抗生素的一類β-內酰胺酶。包括Ambler分子分類的A、B、D類酶。不動桿菌屬中最主要的碳青霉烯酶是D類酶。D類酶目前報道按照氨基酸同源性可分為8組,在鮑曼不動桿菌中報道的主要4組是OXA-23組、OXA-24組、OXA-51組、OXA-58組。D類碳青霉烯酶對碳青霉烯類抗生素的水解

4、活性較低,對其耐藥性的介導常合并外膜通透性的降低和/或外排泵的激活。而且,最近發(fā)現(xiàn)oxa-23-like和oxa-51-like基因上游存在插入序列ISAbal,而oxa-58基因與插入序列ISAba2、ISAba3相關。插入序列ISAba可能與OXA類碳青霉烯酶編碼基因的同源重組、基因轉移以及表達調控關系密切。近年來,一類特殊的16S rRNA甲基化酶被發(fā)現(xiàn)——它能保護細菌的16SrRNA也即氨基糖苷類抗生素的主要作用靶位,引起廣譜的

5、氨基糖苷類抗生素耐藥,并且可在人和動物的致病菌間傳播。armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA是從臨床感染株中發(fā)現(xiàn)的6種主要的16S rRNA甲基化酶基因,最近歐洲和日本學者先后在一系列臨床致病菌中發(fā)現(xiàn)該類基因,并且發(fā)現(xiàn)它們常位于可轉移的質粒上,可在體外接合到受體菌。 本研究收集了我國6個省市25家醫(yī)院的700株鮑曼不動桿菌,篩選到342株碳青霉烯類抗生素耐藥的鮑曼不動桿菌,對這些菌株的同源性、碳青霉烯酶基因型

6、及其與插入序列ISAbal的關系、16Sr RNA甲基化酶基因的分布情況等進行了系統(tǒng)深入的研究。 1.碳青霉烯類抗生素耐藥鮑曼不動桿菌的篩選及耐藥性研究 使用K-B法(紙片擴散法)從700株鮑曼不動桿菌中篩選到了342株亞胺培南耐藥的鮑曼不動桿菌。利用瓊脂稀釋法和Etest法測定342株CRAB對14種常用抗菌藥物的體外最低抑菌濃度。發(fā)現(xiàn)所有亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌對美羅培南耐藥,其中多粘菌素E耐藥率最低為10.8%,頭

7、孢哌酮/舒巴坦、氨芐西林/舒巴坦耐藥率分別為54.2%和68.0%,米諾環(huán)素耐藥率75.9%,其余抗菌藥物耐藥率均大于90.0%. 2.碳青霉烯類抗生素耐藥鮑曼不動桿菌同源性研究 利用脈沖場凝膠電泳(PFGE)對342株CRAB進行了同源性研究。342株鮑曼不動桿菌菌株根據(jù)脈沖場凝膠電泳條帶分析發(fā)現(xiàn)其中303株屬于6個主要流行克隆株。其中A克隆共62株,分布在浙江、北京、重慶3個省市,并且在浙江播及7個城市的8家醫(yī)院;B

8、克隆32株,分布于杭州、上海、沈陽的3家醫(yī)院;C克隆有160株,分布于浙江和上海,播散到了浙江8個城市的12家醫(yī)院;D克隆有31株菌株,分布于浙江杭州和金華的3家醫(yī)院;屬于克隆E的10株菌株在廣州中山醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院流行;屬于克隆F的8株菌株在金華中心醫(yī)院流行。CRAB在我國呈嚴重的大范圍流行態(tài)勢,已經(jīng)出現(xiàn)醫(yī)院內的爆發(fā)流行、醫(yī)院間甚至城市間的播散。需要采取切實有效的措施及時進行干預。 3.碳青霉烯類抗生素耐藥鮑曼不動桿菌碳青

9、霉烯酶基因型及其與插入序列ISAbal關系研究 利用超聲破碎法提取β-內酰胺酶粗提物,三維實驗、等電點測定、雙紙片協(xié)同實驗,檢測CRAB所產(chǎn)碳青霉烯酶:利用PCR檢測碳青霉烯酶基因、序列分析明確碳青霉烯酶基因型;利用重疊PCR研究oxa基因與插入序列ISAbal的關系;接合實驗、質粒抽提、電轉化、Southern雜交等明確碳青霉烯酶基因定位。342株碳青霉烯類抗生素耐藥鮑曼不動桿菌全部攜帶oxa-66基因,其中13株的oxa-6

10、6基因上游7bp處檢測到插入序列ISAbal。322株CRAB菌株攜帶oxa-23基因,其中314株菌株oxa-23基因上游34bp處檢測到插入序列ISAbal。ISAbal-oxa-23、ISAbal-oxa-66已在Genbank登錄,登錄號分別為:DQ923478、DQ923479。342株菌株中未檢測到金屬酶(IMP、VIM、SIM-1)基因,未檢測到oxa-24組和oxa-58組D類碳青霉烯酶基因。鮑曼不動桿菌對碳青霉烯類抗生

11、素的耐藥性不能通過接合、轉化實驗轉移到受體大腸埃希菌,質粒抽提也未成功。Southern雜交提示oxa-23基因極可能位于菌株染色體上。研究證明,我國CRAB最主要的碳青霉烯酶基因型是oxa-23、oxa-66:插入序列ISAbal與oxa基因關系密切,在介導我國鮑曼不動桿菌對碳青霉烯類抗生素耐藥中起重要作用。 4.碳青霉烯類抗生素耐藥鮑曼不動桿菌16s rRNA甲基化酶基因分布研究 瓊脂稀釋法測定342株CRAB對5

12、種氨基糖苷類抗生素的MIC值,PCR篩選6種16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA,克隆測序明確基因型;接合試驗、質粒抽提、轉化實驗,以及Southern雜交確定armA基因定位。342株碳青霉烯類抗生素對妥布霉素、阿米卡星、慶大霉素、異帕米星、奈替米星5種氨基糖苷類抗生素全部耐藥菌株287株,其中221株檢出armA基因;未發(fā)現(xiàn)rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA基因陽性菌株

13、。armA基因陽性菌株PFGE分型以A、B、C 3型為主。堿裂解法反復抽提未得到質粒,多次接合、轉化試驗未成功;Southern雜交顯示armA基因分別位于克隆A、B、C菌株染色體ApaI酶切脈沖場凝膠電泳約220kb、300kb、220kb大小的DNA片斷上。16S rRNA甲基化酶基因armA在我國CRAB中廣泛存在,armA陽性菌株以克隆播散形式廣泛流行。armA基因定位于鮑曼不動桿菌的染色體上。 以上研究表明:

14、1、我國CRAB對各類抗菌藥物耐藥率高,多粘菌素E耐藥率最低為10.8%,頭孢哌酮/舒巴坦、氨芐西林/舒馬坦耐藥率分別為54.2%和68.0%.臨床可以根據(jù)藥敏結果選用含舒巴坦制劑,必要時可在嚴密監(jiān)測腎功能的情下考慮多粘菌素E治療; 2、CRAB在我國呈大范圍流行態(tài)勢,CRAB主要以克隆播散傳播,已經(jīng)出現(xiàn)醫(yī)院內的爆發(fā)流行、醫(yī)院間甚至城市間的播散。需要采取切實有效的措施及時進行干預。 3、我國CRAB最主要的碳青霉烯酶基

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論