鮑曼不動(dòng)桿菌同源性分析與碳青霉烯類耐藥機(jī)制研究.pdf

1、目的：本研究通過了解我院鮑曼不動(dòng)桿菌感染情況、耐藥特征與流行趨勢(shì)，對(duì)臨床菌株與環(huán)境菌株進(jìn)行同源性分析比較，了解院內(nèi)是否存在鮑曼不動(dòng)桿菌播散流行，為控制院內(nèi)感染提供依據(jù)；檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶基因與主動(dòng)外排系統(tǒng)結(jié)構(gòu)基因與調(diào)控基因在亞胺培南耐藥組(imipenem-resistant Acinetobacter baumannii IRAB)與敏感組(imipenem-sensitive Acinetobacter baumannii ISAB)

2、中分布差異，并對(duì)主要外排基因進(jìn)行表達(dá)量分析，深入探討鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類藥物的耐藥機(jī)制。
　　方法：1、本實(shí)驗(yàn)收集2011年7月到10月我院臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌共81株，同期對(duì)神經(jīng)外科重癥監(jiān)護(hù)病房（ICU）進(jìn)行環(huán)境污染調(diào)查采樣，在患者病床、桌面、呼吸機(jī)表面、房間門把手等部位分離到鮑曼不動(dòng)桿菌28株。瓊脂稀釋法檢測(cè)上述菌株對(duì)臨床常用13種抗菌藥物的最低抑菌濃度（minimum inhibitory concentration M

3、IC）。2、采用腸桿菌科基因間重復(fù)序列 PCR(enterbacteriat repetitive intergenic consensus ERIC-PCR）與脈沖場(chǎng)凝膠電泳（pulsed-field gel electrophoresis PFGE）對(duì)臨床分離81株鮑曼不動(dòng)桿菌和28株環(huán)境分離菌株進(jìn)行基因分型，分析其主要流行型別。3、外排泵抑制試驗(yàn)（PAβ N）檢測(cè)外排泵表型。聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reac

4、tion PCR）檢測(cè)81株臨床菌株β-內(nèi)酰胺酶基因與RND家族3個(gè)主要外排系統(tǒng)AdeABC、AdeIJK及 AdeFGH結(jié)構(gòu)基因與調(diào)控基因分布情況，比較其在 IRAB及ISAB中分布差異，進(jìn)一步使用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Realtime-PCR）檢測(cè)其主要外排基因表達(dá)水平。
　　結(jié)果：臨床分離81株鮑曼不動(dòng)桿菌只對(duì)米諾環(huán)素耐藥率稍低，為30.9％；其次為亞胺培南，耐藥率為53.1%；對(duì)其它抗菌藥物耐藥率均超過60%；對(duì)頭孢西

5、丁、復(fù)方新諾明耐藥率最高，分別為97.5%、93.8%。環(huán)境分離28株鮑曼不動(dòng)桿菌相比臨床分離菌株對(duì)13種抗菌藥物更為敏感，對(duì)亞胺培南和美羅培南的耐藥率僅為7.1%、3.6%；對(duì)米諾環(huán)素耐藥率為10.7%；除頭孢西丁外，對(duì)其它抗菌藥物耐藥率在20%～50%。ERIC-PCR結(jié)果顯示81株臨床分離菌株可分為6型，A型65株，為主要克隆株，B型7株，C型6株，D、E、F型各1株。28株環(huán)境分離菌也分為6型，A型13株。81株鮑曼不動(dòng)桿菌 P

6、FGE基因分型分為7型，包括 A型59株，B型7株，C型4株，D型5株，E型3株，F(xiàn)型2株、G型1株。環(huán)境分離菌分為9型，A型15株，B型2株，C型1株，D型2株，E型3株，F(xiàn)型2株，G、H、I型各1株。在β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)中，所有菌株中均攜帶OXA-51基因，未檢測(cè)到OXA-24、OXA-58、VIM-1以及VIM-2基因。β-內(nèi)酰胺酶基因AmpC、OXA-23與IMP-1的檢測(cè)率分別為83.9%、71.6%及54.3%。加入外排泵抑制

7、劑 PAβN，81株鮑曼不動(dòng)桿菌分離株中，43株（53%）對(duì)亞胺培南的MICs有了4～32倍的降低，可認(rèn)為外排泵表型陽性。在AdeABC外排系統(tǒng)中，adeB、adeS和adeR的檢出率分別為78%、78%和74%。在AdeIJK及AdeFGH外排系統(tǒng)中，adeJ、adeL、adeF、adeG和adeH的檢出率均大于90%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，β-內(nèi)酰胺酶基因AmpC、OXA-23及外排基因adeB與adeG在IRAB組和ISAB組中的分布差異

8、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在定量PCR中，IRAB的adeB、adeJ和adeG基因的表達(dá)量平均為ISAB的3.182、2.787和7.298倍，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，adeB和adeG表達(dá)量在IRAB和ISAB中差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：我院鮑曼不動(dòng)桿菌只對(duì)米諾環(huán)素耐藥率稍低，其次為亞胺培南。臨床可根據(jù)藥敏結(jié)果選擇合適抗菌藥物。A型克隆株為我院鮑曼不動(dòng)桿菌主要流行株，臨床菌株與環(huán)境菌株具有較高同源性，科室間存在交叉感染的可能性，需采取切實(shí)有效