昆山地區(qū)碳青霉烯類耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的碳青霉烯酶及同源性研究.pdf

1、目的:
　　調(diào)查分析本地區(qū)臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌的感染分布特征及其對(duì)抗菌藥物的耐藥性，為臨床提供控制和治療該菌感染的可靠依據(jù);應(yīng)用酶抑制劑增強(qiáng)試驗(yàn)和改良Hodge試驗(yàn)對(duì)亞胺培南耐藥的菌株進(jìn)行碳青霉烯酶的表型篩選，采用PCR擴(kuò)增相應(yīng)碳青霉烯酶基因，掌握碳青霉烯類耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥基因在本地區(qū)的分布情況，為臨床治療碳青霉烯類抗生素耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染和控制其爆發(fā)流行提供理論依據(jù);通過泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌隨機(jī)擴(kuò)增DNA多態(tài)性同源性分析，用

2、于醫(yī)院感染控制和流行病學(xué)的調(diào)查研究。
　　方法:
　　1.收集本地區(qū)某醫(yī)院2010年1月至2012年12月間臨床分離的174株鮑曼不動(dòng)桿菌（非重復(fù)菌株)，應(yīng)用法國(guó)梅里埃ATB微生物鑒定分析系統(tǒng)對(duì)其進(jìn)行重新鑒定。
　　2.采用紙片擴(kuò)散法測(cè)定鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)14種抗菌藥物的敏感性，依據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI:Clinical and Laboratory Standards Institute)最新版標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行敏

3、感性判斷。
　　3.分別采用亞胺培南-EDTA紙片增效法和改良Hodge試驗(yàn)對(duì)亞胺培南耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行金屬酶及苯唑西林酶的表型初篩。
　　4.設(shè)計(jì)合成針對(duì)OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、IMP-1和VIM-1的引物序列，采用PCR方法對(duì)70株碳青霉烯類耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行特異性擴(kuò)增，以確定其在醫(yī)院感染鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離株中的分布;對(duì)部分菌株進(jìn)行克隆測(cè)序，分析其攜帶的耐藥基因情況及其表達(dá)的耐藥信

4、息;采用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)分析同源性，明確是否存在醫(yī)院感染的院內(nèi)流行以及醫(yī)院間的交叉?zhèn)鞑ァ?br>　　結(jié)果:
　　1.分離出的174株鮑曼不動(dòng)桿菌，標(biāo)本主要來源于痰液;科室分布以ICU、呼吸科為主;藥敏試驗(yàn)顯示除對(duì)頭孢哌酮/舒巴坦耐藥率較低外，對(duì)其余13種抗生素的耐藥率均超過50％，而且多重耐藥較為嚴(yán)重。
　　2.70株耐亞胺培南菌株金屬酶耐藥表型10株，苯唑西林酶耐藥表型68株;PCR均擴(kuò)增出OXA-51，有

5、8株IMP-1陽性菌株，66株攜帶OXA-23型基因;本次實(shí)驗(yàn)OXA-24、OXA-58及VIM-1基因擴(kuò)增結(jié)果均為陰性。
　　3.RAPD分型發(fā)現(xiàn)70株對(duì)亞胺培南耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌屬于8個(gè)型，其中以A型（34株）、B型（8株）、C型（9株）基因型為主。
　　結(jié)論:
　　1.鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，應(yīng)加強(qiáng)耐藥性監(jiān)測(cè)，臨床應(yīng)根據(jù)藥敏結(jié)果合理使用抗菌藥物。
　　2.本地區(qū)CRAB最主要的碳青霉烯酶基因是OXA-51