人腦膠質(zhì)瘤組織中EGFR、ABCG2表達(dá)分析及其在血管生成中的作用.pdf

1、1.背景與目的：表皮生長因子受體(EGFR)在很多人類腫瘤中都存在著過表達(dá)，已被當(dāng)作一個治療靶點(diǎn)進(jìn)行了廣泛的研究，但是否是腫瘤、尤其是膠質(zhì)瘤發(fā)生的病因分子研究報告尚少。腫瘤血管形成以及抗腫瘤血管治療是腫瘤學(xué)研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)，近耒研究表明腫瘤血管管壁除了傳統(tǒng)認(rèn)為的由血管內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成之外，尚有腫瘤細(xì)胞本身直接參與構(gòu)成腫瘤血管(擬態(tài)血管生成)和腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞共同參與構(gòu)成腫瘤血管(馬賽克血管)之可能，但在包括膠質(zhì)瘤在內(nèi)的大多數(shù)腫瘤中尚難

2、以肯定后二者的存在，只是在視網(wǎng)膜惡性黑色素瘤中較多見。本實(shí)驗(yàn)旨在探討EGFR基因在針對膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展相關(guān)組織芯片中的表達(dá)及意義，并運(yùn)用CD34---PAS雙染觀察人腦膠質(zhì)瘤裸小鼠皮下和顱內(nèi)移植瘤中的血管生成模式，同時探討干細(xì)胞標(biāo)志物ABCG2在移植瘤中的表達(dá)。 2.方法：針對上述目的分別構(gòu)建了兩張不同的組織芯片。第一張組織芯片中包含有不同惡性程度的人腦膠質(zhì)瘤臨床標(biāo)本、裸小鼠移植瘤標(biāo)本、體外細(xì)胞系球體、腦腫瘤干細(xì)胞球體和相應(yīng)的對

3、照標(biāo)本共118例標(biāo)本，對其行EGFR的SABC法免疫組化染色，分析其表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度。同時運(yùn)用熒光實(shí)時定量PCR技術(shù)檢測芯片中包含的幾個細(xì)胞系EGFR mRNA的表達(dá)含量，以對芯片中蛋白水平的研究進(jìn)一步驗(yàn)證。第二張組織芯片包含有建立的人腦膠質(zhì)瘤裸小鼠皮下移植瘤模型30例、顱內(nèi)移植瘤模型20例及對照組標(biāo)本共58例標(biāo)本，對其行HE染色和免疫組織化學(xué)染色，光鏡下觀察兩種移植瘤中的血管生成模式及ABCG2的表達(dá)率和表達(dá)部位。 3.結(jié)果：

4、第一張組織芯片中觀察到EGFR染色主要位于細(xì)胞胞膜。在71例人腦膠質(zhì)瘤組織中，EGFR陽性表達(dá)率為46.5％，各級別人腦膠質(zhì)瘤組織中EGFR陽性表達(dá)率分別為Ⅰ級11.1％，Ⅱ級28.0％，Ⅲ級60.9％，Ⅳ級78.6％；Ⅰ級、Ⅱ級與Ⅲ級、Ⅳ級陽性率比較，兩者差異顯著(X<'2>=13.813，P<0.001)；并且EGFR的陽性表達(dá)率與病理級別呈直線正相關(guān)(r=0.991，P=0.009)。在正常人腦組織、正常裸小鼠骨髓及神經(jīng)干細(xì)胞球體

5、中EGFR均呈陰性表達(dá)；在裸小鼠皮下移植瘤、人腦膠質(zhì)瘤體外細(xì)胞系球體及腦腫瘤干細(xì)胞球體中EGFR均呈陽性表達(dá)。熒光實(shí)時定量PCR檢測顯示EGFR mRNA在人腦膠質(zhì)瘤體外細(xì)胞系球體及腦腫瘤干細(xì)胞球體中表達(dá)含量高，在神經(jīng)干細(xì)胞球體中表達(dá)含量極低，與芯片中蛋白水平的檢測相一致。第二張組織芯片中觀察到血管內(nèi)皮細(xì)胞被覆的血管在人腦膠質(zhì)瘤裸小鼠皮下和顱內(nèi)移植瘤模型中最為常見；馬賽克血管見于5/30皮下移植瘤和6/20顱內(nèi)移植瘤；擬態(tài)血管見于18/

6、30皮下移植瘤和13/20顱內(nèi)移植瘤；作為對照的人正常腦組織中只見到內(nèi)皮細(xì)胞被覆的血管，未見到馬賽克血管和擬態(tài)血管。在兩種移植瘤中局域性的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)GFAP表達(dá)缺失。ABCG2在兩種移植瘤組織中均有表達(dá)，平均陽性細(xì)胞占有率約為4％，且其表達(dá)部位與移植瘤的血管分布相吻合。 4．結(jié)論：EGFR在正常組織和神經(jīng)干細(xì)胞中未見表達(dá)，而在腫瘤中特別是腦腫瘤干細(xì)胞中高表達(dá)，并且是隨著腫瘤惡性程度的增高而表達(dá)量增加，因此可作為膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的