持續(xù)缺氧致慢性鼻-鼻竇炎小鼠HIF-1α、IL-17、VEGF、NF-KB因子表達的時序性及解剖部位差異性和機制研究.pdf

1、第一部分：持續(xù)低氧致慢性鼻-鼻竇炎小鼠模型的建立及機制研究
　　目的:建立持續(xù)低氧致慢性鼻-鼻竇炎小鼠模型。研究持續(xù)低氧引起的氧化應激反應能否作為獨立因素導致慢性鼻-鼻竇炎以及低氧所致慢性鼻-鼻竇炎炎癥程度的時序性變化。
　　方法:選取8周齡C57BL6小鼠為研究對象。將小鼠置于常壓低氧倉飼養(yǎng),氧氣濃度控制在8-11％。在小鼠入倉后第0,2,4,6周取材觀察鼻腔黏膜、骨質(zhì)形態(tài)學變化。電鏡觀察鼻腔黏膜纖毛倒伏及細菌生物膜形成情

2、況。按入倉后的時間點0,2,4,6周分別檢測HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表達變化。
　　結(jié)果:1、體式顯微鏡下大體觀比較:與0周對照組相比,缺氧2周鼻腔及竇口黏膜輕度水腫,充血。缺氧4周鼻腔及竇口黏膜水腫明顯,竇口被水腫黏膜阻塞。缺氧6周鼻腔及竇口黏膜充血腫脹明顯。
　　2、HE染色:與0周對照組相比,缺氧2周鼻腔及竇口內(nèi)可見炎癥細胞浸潤,缺氧4周鼻腔及竇口黏膜表面大量炎癥細胞浸潤,缺氧6周鼻腔及竇口黏膜

3、表面內(nèi)大量炎癥細胞浸潤,鼻腔內(nèi)可見大量膿性分泌物內(nèi)有炎癥細胞聚集。
　　3、免疫組化:與0周對照組相比,HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB在免疫組化切片上的目的因子染色隨時間加深,面積變廣。
　　4、電鏡:與0周對照組相比,缺氧2周鼻腔黏膜纖毛倒伏情況不明顯,未見黏膜上有細菌生物膜結(jié)構(gòu)出現(xiàn)。缺氧4周鼻腔黏膜纖毛倒伏,黏膜上可見細菌生物膜結(jié)構(gòu)。缺氧6周鼻腔黏膜纖毛倒伏明顯,部分脫落,黏膜上可見細菌生物膜結(jié)構(gòu)。

4、>　　5、Western-Blot分析:與0周對照組相比,缺氧2周時鼻腔黏膜組織中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表達水平上調(diào),有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。缺氧4周時鼻腔黏膜組織中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表達水平較缺氧2周時繼續(xù)上調(diào),有統(tǒng)計學差異華中科技大學博士學位論文(p<0.05)。缺氧6周時鼻腔黏膜組織中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表達水平較缺氧4周時出現(xiàn)下調(diào),有統(tǒng)計學

5、差異(p<0.05),但缺氧6周時鼻腔黏膜組織中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表達水平較0周對照組表達水平還是明顯上調(diào),有顯著統(tǒng)計學差異(p<0.01)
　　6、RT-PCR分析:與0周對照組相比,缺氧2周時鼻腔黏膜組織中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表達水平上調(diào),有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。缺氧4周時鼻腔黏膜組織中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表達水平較缺氧2周時繼續(xù)上調(diào),

6、有統(tǒng)計學差異(p<0.05)。缺氧6周時鼻腔黏膜組織中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表達水平較缺氧4周時出現(xiàn)下調(diào),有統(tǒng)計學差異(p<0.05),但缺氧6周時鼻腔黏膜組織中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表達水平較0周對照組表達水平還是明顯上調(diào),有顯著統(tǒng)計學差異(p<0.01)。表達水平動態(tài)變化的趨勢與Western-Blot一致。
　　結(jié)論:
　　1、持續(xù)低氧引起的氧化應激反應在C57BL6

7、小鼠可以作為獨立因素導致慢性鼻-鼻竇炎。
　　2、持續(xù)低氧致慢性鼻-鼻竇炎炎癥程度有時序性變化,炎癥最早于缺氧后2周出現(xiàn),缺氧4周時達到頂峰,在缺氧6周時下調(diào),但仍明顯高于0周對照組。表明缺氧4周之后鼻腔黏膜對缺氧刺激出現(xiàn)耐受,但炎癥已不可逆轉(zhuǎn)。
　　第二部分：慢性鼻-鼻竇炎形成過程中鼻腔不同解剖位置IL-17,NF-KB,VEGF因子表達時序性變化
　　目的:慢性低氧環(huán)境致小鼠慢性鼻-鼻竇炎過程中,檢測鼻腔不同解剖位

8、置黏膜炎癥相關(guān)因子表達的動態(tài)變化,探討炎癥相關(guān)因子在鼻腔不同解剖位置表達的差異性
　　方法:選取8周齡C57BL6小鼠為研究對象,置于常壓低氧艙內(nèi)飼養(yǎng),氧氣濃度控制在8-11%。從4個解剖部位(SB鼻中隔、BN總鼻道黏膜、ZN中鼻甲黏膜、SN上頜竇黏膜)收取黏膜、骨質(zhì)標本,按入倉后的時間點0,2,4,6周分部位分時間點檢測HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表達變化,同時行熒光雙標染色。
　　結(jié)果:
　　1

9、、RT-PCR分析:1)、同一時間點鼻腔不同解剖位置的黏膜中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表達水平SB

10、高于0周對照組。
　　2、Western-Blot分析:與RT-PCR的趨勢一致。1)、同一時間點鼻腔不同解剖位置的黏膜中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表達水平SB

11、持續(xù)上調(diào),4周后下調(diào),P<0.05,但缺氧6周時因子的表達水平仍明顯高于0周對照組。
　　3、免疫熒光雙染:HIF-1α與IL-17,VEGF,NF-KB共存于鼻腔黏膜細胞膜及骨膜表面,隨持續(xù)缺氧刺激的時間變化,雙標共存因子的染色變深,范圍變廣。
　　結(jié)論:
　　1、鼻腔不同解剖位置黏膜HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表達水平動態(tài)變化的趨勢一致,即時序性變化相同。0-4周上調(diào),4周后下調(diào),6周的表達水平