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文檔簡介
1、FSH在動物生殖過程中起重要作用,F(xiàn)SH藥物制劑已廣泛應用于提高家畜的繁殖力。目前FSH制品大多是從牲畜的垂體提取,混有LH且易造成病原感染。國內(nèi)外學者已經(jīng)克隆出多種動物的FSH基因,并在哺乳動物細胞表達系統(tǒng)中進行了體外表達,但表達量很低。采用哺乳動物的乳腺作為反應器,可有效提高外源目的基因的表達量。本研究就是在此基礎上,構(gòu)建以山羊FSH及其長效類似物乳腺暫態(tài)表達載體,通過乳腺暫態(tài)表達,檢測載體構(gòu)建的合理性和有效性,為一步研究轉(zhuǎn)基因動物
2、打下基礎,促進轉(zhuǎn)基因動物技術的應用和發(fā)展。 設計含相應酶切位點的特異性引物,以pVITRO-FSHβ-CTP-α為模板,通過兩次PCR擴增反應分別獲得含特異性酶切位點的FSHβ-CTP、FSHβ-CTP-α;將FSHβ-CTP、FSHβ-CTP-α和載體pcDNA經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切,再進行連接和轉(zhuǎn)化,從而成功構(gòu)建了乳腺暫態(tài)表達載體pcDNA-FSHβ-CTP以及pcDNA-FSHβ-CTP-α。通過酶切鑒定FSHβ-CTP、FS
3、Hβ-CTP-α序列正確。對載體pEGFP-N1進行雙酶切,獲得熒光蛋白基因EGFP作為報告基因,再將EGFP亞克隆至pcDNA,獲得pcDNA-EGFP。將載體pcDNA-FSHα,β、pcDNA-FSHα,β-CTP、pcDNA-FSHβ-CTP-α以及pcDNA-EGFP采用兩種不同的轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染至懷孕末期小鼠乳腺組織,小鼠分娩后12天內(nèi)收集乳汁。放免檢測乳汁當中FSH的表達量,以及表達持續(xù)的時間,同時制作乳腺組織細胞涂片,觀察表
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