鹽酸小檗堿對T2DM大鼠腸道菌群及血內(nèi)毒素水平的影響.pdf

1、目的：
　　觀察2型糖尿?。═2DM）大鼠成模過程中血漿內(nèi)毒素水平與胰島素抵抗的關(guān)系；觀察鹽酸小檗堿干預(yù)T2DM大鼠的療效，及其對宿主腸道菌群結(jié)構(gòu)和血漿內(nèi)毒素水平的影響，探討鹽酸小檗堿治療T2DM大鼠的作用機(jī)制。
　　方法：
　　選擇健康的雄性SD大鼠66只，出生年齡均為6-8周，體重180g-200g，隨機(jī)分為兩組:正常對照組（簡稱 NC組， n=24）和 T2DM組（簡稱 T2DM組， n=42）。NC組大鼠普通飼

2、料喂養(yǎng)。T2DM組大鼠經(jīng)高糖高脂膳食喂養(yǎng)12周后，隔夜禁食8小時后于腹腔內(nèi)注射鏈脲佐菌素（STZ），劑量為30mg/kg，每隔2日于鼠尾處取血測大鼠的空腹血糖（FBG），F(xiàn)BG>7.8mmol/L則認(rèn)為造模成功，如連續(xù)2次以上FBG<7.8mmol/L則認(rèn)為造模失敗。高糖高脂飼料配方：基礎(chǔ)飼料65％、豬油10%、蔗糖15%、干蛋黃10%。
　　于T2DM大鼠成模過程中，即高糖高脂飼料喂養(yǎng)第4、8周時，以及成模后，分別隨機(jī)選取NC組

3、和T2DM組各6只大鼠，禁食8小時后給予20%烏拉坦0.4 ml/100g麻醉大鼠后，測定大鼠體重，并經(jīng)腹主動脈采血，無菌條件下分離血漿2ml分裝于無菌EP管內(nèi)，同時分離血清，上述標(biāo)本均于-80℃凍存，留取部分肝臟右葉組織，置于包埋盒內(nèi)迅速投入10%中性福爾馬林液24小時后制備臘塊。
　　T2DM組成功獲得T2DM大鼠20只，取其中體重相近的18只大鼠隨機(jī)分為持續(xù)高糖高脂對照組（簡稱HSHF組，n=6，繼續(xù)高糖高脂飼料喂養(yǎng))、單純

4、飲食干預(yù)組（簡稱干預(yù)I組， n=6，改為普通飼料喂養(yǎng)）、鹽酸小檗堿干預(yù)組（簡稱干預(yù)II組，n=6，改為普通飼料喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上給予鹽酸小檗堿200mg/kg/d灌胃)。干預(yù)8周后，與正常對照組大鼠一起同上處理，測定大鼠體重，留取血漿、血清凍存于-80℃冰箱，制備肝臟右葉組織臘塊。同時留取少量結(jié)腸內(nèi)糞便，取2ml置于Rnase EP管內(nèi)液氮冷凍30分鐘后移置-80℃冰箱保存。
　　上述血標(biāo)本同批測定以下指標(biāo)，鱟試劑顯色基質(zhì)法測血漿內(nèi)毒素

5、（LPS），免疫濁度法測血清C反應(yīng)蛋白（CRP）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、血甘油三酯（TG）、空腹血糖(FBG)，放免法測空腹胰島素（FINS），計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR），計(jì)算公式：FPG(mmol/L)×FINs(mIU/L)/22.5。RT-PCR測定糞便中雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌的含量。肝臟蠟塊行HE染色，觀察肝組織病理學(xué)變化。
　　結(jié)果：
　　1.高糖高脂飲食聯(lián)合STZ誘發(fā)大鼠T2DM形成過程中胰島素抵

6、抗程度與血內(nèi)毒素水平之間的關(guān)系：
　　1.1.第4周末，與NC組相比，T2DM組大鼠體重增加，ALT、TG、CRP、LPS水平升高，F(xiàn)PG、FINS及HOMA-IR無明顯變化，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；T2DM組大鼠的肝臟病理切片可見以小泡性脂滴為主的肝細(xì)胞脂肪變性，氣球樣變。
　　1.2.第8周末，與NC組相比，T2DM組大鼠體重增加，ALT、TG、CRP、LPS水平均升高， FPG、FINS及 HOMA-IR水平

7、輕度增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；T2DM組大鼠肝臟病理切片觀察見以大泡性脂滴為主的肝細(xì)胞脂肪變性，氣球樣變。
　　1.3.第14周末，與NC組相比，T2DM組大鼠毛色無光澤，活動少，體重增加較為顯著，ALT、TG、CRP、LPS水平顯著升高，F(xiàn)PG、FINS顯著升高，HOMA-IR增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；T2DM組大鼠肝臟組織病理切片觀察見肝細(xì)胞呈彌漫性空泡樣脂肪變性，肝細(xì)胞脂肪變性，氣球樣變，炎性細(xì)胞

8、浸潤，炎癥程度加重。
　　1.4.血LPS水平與IR程度之間呈正相關(guān)，r=0.740，P<0.01。
　　2.鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM可能的作用機(jī)制：
　　2.1.鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM大鼠的療效：與正常對照組（NC組）相比，干預(yù) I組、干預(yù) II組大鼠體重、FPG、FINS、ALT、TG均高于 NC組（P<0.05）；肝臟病理切片可見：肝細(xì)胞脂肪變性程度明顯于NC組。與持續(xù)高糖高脂對照組（ HSHF

9、組）比較，干預(yù)I組、干預(yù) II組大鼠體重、FPG、FINS、ALT、TG均低于HSHF組（P<0.05）；肝組織病理切片示：肝細(xì)胞脂肪變性，氣球樣變，少量炎性細(xì)胞浸潤病變較HSHF組減輕。與干預(yù)I組相比，干預(yù)II組HOMA-IR、CRP、LPS減少顯著（P<0.05）；肝細(xì)胞脂肪變性程度明顯改善于干預(yù)I組，炎癥浸潤顯著減少。
　　2.2.鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM大鼠后內(nèi)毒素水平的變化：與NC組相比，干預(yù)I組、干預(yù)II組大鼠

10、HOMA-IR、CRP、LPS均高于NC組（P<0.05）；與HSHF組比較，干預(yù)I組、干預(yù)II組大鼠HOMA-IR、CRP、LPS均低于HSHF組（ P<0.05）；與干預(yù)I組相比，干預(yù)II組大鼠HOMA-IR、CRP、LPS顯著減少（P<0.05）。
　　2.3.鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM大鼠后腸道菌群的變化
　　2.3.1.鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM大鼠后革蘭氏陰性菌大腸桿菌屬的變化：與NC組相比，干預(yù)Ⅰ組

11、、干預(yù)Ⅱ組大腸桿菌屬豐度減少（ P<0.05）；與HSHF組相比，干預(yù)Ⅰ組、干預(yù)Ⅱ組大腸桿菌屬豐度減少（P<0.05）；與干預(yù)Ⅰ組相比，干預(yù)Ⅱ組大腸桿菌屬減少顯著（P<0.05）。
　　2.3.2.鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM大鼠后益生菌乳桿菌屬和雙歧桿菌屬的變化：與 NC組相比，干預(yù)Ⅰ組、干預(yù)Ⅱ組乳酸菌屬、雙歧菌屬豐度增加（P<0.05）；與HSHF組相比，干預(yù)Ⅰ組、干預(yù)Ⅱ組乳酸菌屬、雙歧菌屬豐度增加（ P<0.05）；與干