小檗堿對2型糖尿病大鼠巨噬細(xì)胞功能的影響.pdf

1、目的 觀察小檗堿對2型糖尿病大鼠巨噬細(xì)胞CD36、PPARY、LPL、lvlMP-9和TIMP一1表達(dá)的影響．探討巨噬細(xì)胞在2型糖尿病發(fā)病機(jī)制中的作用以及小檗堿對糖尿病及其并發(fā)癥的防治機(jī)制。 方法 雄性SD大鼠54只分成四組：正常對照組10只、高脂組M只、2型糖尿病組15只、小檗堿治療組15只。后三組喂以高糖高脂飼料(飼料組成：lO．0％豬油，20．0％蔗糖，2．5％膽固醇，1．0％膽酸鹽，66．5％常規(guī)飼料)一

2、個(gè)月，誘發(fā)胰島素抵抗，糖尿病組和治療組繼以低劑量鏈脲菌素(STZ，30mg/kg，)腹腔注射，誘發(fā)胰島素代償性分泌障礙，使之產(chǎn)生高血糖癥，復(fù)制2型糖尿病大鼠模型。小檗堿治療組按lOOmg／kg小檗堿劑量灌胃；對照組、高脂組及糖尿病組灌胃等容積2％羧甲基纖維素鈉，每天一次，連續(xù)12周。治療結(jié)束后禁食12小時(shí)后處死大鼠，取血觀測下列指標(biāo)：血糖、血TC、TG、LDL、HDL及血胰島素；制備巨噬細(xì)胞：運(yùn)用改良的cohn氏法灌洗和培養(yǎng)腹腔和肺泡巨

3、噬細(xì)胞，制成巨噬細(xì)胞懸液。并檢測巨噬細(xì)胞內(nèi)各指標(biāo)表達(dá)水平的變化：用流式細(xì)胞學(xué)方法測定各組大鼠肺泡和腹腔巨噬細(xì)胞CD36、PPARY的蛋白表達(dá)水平：RT-PCR法分別測定肺泡和腹腔巨噬細(xì)胞CD36、PPARY、LPL、MMP一9和TIMP—l基因表達(dá)水平；雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測巨噬細(xì)胞oxLDL含量；以化學(xué)比色法測定巨噬細(xì)胞一氧化氮合酶(NOS)活性、硫代巴比妥酸法測定丙二醛(MDA)含量，硝酸還原酶法測定一氧化氮(N0

4、)含量。 結(jié)果 1、血糖、血胰島素、血脂：與正常對照組相比，2型糖尿病組血糖、血胰島素、TC、TG和LDL升高(P<0．01)，HDL下降(P<0．01)。治療組血糖、血胰島素、LDL水平較糖尿病組明顯降低(P<0．05)，TC、TG也明顯降低(P<0．01)，HDL較糖尿病組有升高趨勢，但無顯著性差異。 2、肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)oxLDL的含量，經(jīng)ELIS^法測定顯示：糖尿病組肺泡巨噬細(xì)胞oxLDL含量較正常組明顯升

5、高(P

6、PCR顯示：糖尿病組肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)CD36、PPARY和LPLmRNA表達(dá)較正常均組顯著升高(P<0．01)；經(jīng)小檗堿治療后，CD36mRNA表達(dá)降低(P

7、TIMP-1mRNA表達(dá)降低(P

8、顯降低(P

9、低(P

10、D，與糖尿病組比較有顯著性差異。 10、腹腔巨噬細(xì)胞內(nèi)MMP一9和TIMP一1的基因表達(dá)：與正常對照組相比，糖尿病組腹腔巨噬細(xì)胞MMP-9mRNA明顯升高(P

11、常對照組相比，糖尿病大鼠腹腔巨噬細(xì)胞內(nèi)MDA和NO含量升高(P<0．01)，NOS活性升高(P<0．01)。經(jīng)小檗堿治療后MDA含量(P<0．05)和№含量明顯下降(P