BMP7對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠晶狀體細(xì)胞作用的研究.pdf

1、分類號(hào)R77V7626C5單位代碼11904學(xué)號(hào)20021057博士研究生學(xué)位論文BMP7對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠晶狀體細(xì)胞作用的研究StudyOHEffectsofBMP7OilLensCellsinTransgenicMice專業(yè)：博士生：導(dǎo)師：導(dǎo)師組：眼科學(xué)苑曉勇孫慧敏教授陳卓教授天津醫(yī)科大學(xué)二零零五年五月叢!呈匡塹查堂堡主型薹生差絲絲塞史蘭塑塞本研究利用晶狀體特異性表達(dá)蛋白ctA品狀體蛋白的啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)人BMP7，制備了在晶狀體特異性表達(dá)人B

2、MP7的轉(zhuǎn)基因小鼠模型，以迸一步了解小鼠晶狀體基本發(fā)育完全時(shí)(P20、P30)轉(zhuǎn)基因BMP7對(duì)小鼠晶狀體細(xì)胞的作用。本研究采用DNA重組技術(shù)構(gòu)建轉(zhuǎn)基因etA—BMP7，經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定構(gòu)建無誤，對(duì)其質(zhì)粒大量擴(kuò)增，經(jīng)酶切、膠分離及純化等分子生物學(xué)技術(shù)獲得目的基因片段，采用顯微注射法制備ⅡA，BMP7轉(zhuǎn)基因小鼠模型，PCR和斑點(diǎn)雜交檢測(cè)小鼠轉(zhuǎn)基因的整合，原位雜交檢測(cè)轉(zhuǎn)基因表達(dá)，病理證實(shí)白內(nèi)障發(fā)生，TUNEL檢測(cè)晶狀體細(xì)胞凋產(chǎn)，免疫組化檢測(cè)C

3、aspase3、CyclinBI、CyclinDl及鈣粘連素E的表達(dá)。結(jié)果如下：1本研究構(gòu)建aABMP7轉(zhuǎn)基因，經(jīng)酶切和測(cè)續(xù)驗(yàn)證無誤，獲得顯微注射片段。2345采用顯微注射法將ocA—BMP7轉(zhuǎn)基因注入FVB／N小鼠受精卵內(nèi)，原核注射和細(xì)胞質(zhì)注射組均獲得轉(zhuǎn)基因小鼠，并經(jīng)PCR、斑點(diǎn)雜交驗(yàn)證轉(zhuǎn)基因整合，原位雜交、晶狀體表現(xiàn)及病理驗(yàn)證其表達(dá)。Caspase3介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因小鼠P20、P30大量晶狀體細(xì)胞凋r：。轉(zhuǎn)基因小鼠P20、P30晶狀體增殖

4、區(qū)上皮細(xì)胞和部分纖維細(xì)胞CyclinDl表達(dá)陽性，對(duì)照小鼠晶狀體表達(dá)陰性，提示轉(zhuǎn)基因BMP7導(dǎo)致該部位細(xì)胞進(jìn)入G1早期；而轉(zhuǎn)基因小鼠與正常對(duì)照小鼠晶狀體對(duì)CyelinBJ表達(dá)差異不明顯，提示轉(zhuǎn)基因BMP7并未導(dǎo)致晶狀體細(xì)胞G2／M異常。轉(zhuǎn)基因小鼠P20、P30晶狀體上皮細(xì)胞鈣粘連素E陽性表達(dá)，『面纖維細(xì)胞陰性表達(dá)，與正常對(duì)照小鼠晶狀體對(duì)鈣粘連素E表達(dá)部位相一致，提示轉(zhuǎn)基因BMP7并未明顯改變上皮的屬性。轉(zhuǎn)基因小鼠P30前囊下上皮細(xì)胞表達(dá)