姜黃素對人晶狀體上皮細(xì)胞增殖的抑制作用.pdf

1、目的:探討姜黃素(curcumin,CUR)對人晶狀體上皮細(xì)胞株SRA01/04(humanlens epithelial cell line SRA01/04，HLEC SRA01/04)增殖的抑制作用及其劑量-效應(yīng)與時間-效應(yīng)的關(guān)系。 方法:(1)細(xì)胞培養(yǎng)：將凍存的HLEC復(fù)蘇后，置于含10％dx牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，收集指數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行以下實驗；(2)四甲基偶氮唑鹽(methylthiazolyl tetrazo

2、lium，MTT)比色法分別測定不同濃度(0、5、10,20、30mg/L)的CUR作用于HLEC不同時間(12h、24h、48h)后細(xì)胞生長抑制的情況：(3)流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometric analysis，F(xiàn)CM)分別檢測不同濃度(0、5、10、20、30mg/L)的CUR用于HLEC 24h后早期細(xì)胞凋亡率的情況；(4)倒置生物相差顯微鏡及DAPI免疫熒光染色(4，6-diamidino-2-phenylindole

3、dihydro-chloride，DAPI)分別觀察不同濃度(0、5、10、20,30mg/L)的CUR作用于HLEC 24h后的形態(tài)學(xué)改變；(5)免疫組織化學(xué)分別觀察不同濃度(0、5、10、20、30mg/L)的CUR作用于HLEC 24h后Caspase-3蛋白的表達(dá)情況。實驗結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果: (1)MTT比色法實驗結(jié)果顯示，作用12h和24h：20mg/L和30mg/L濃度組對HLEC有明顯的抑制作用；作用48

4、h：10mg/L、20mg/L、30mg/L濃度組對HLEC有明顯的抑制作用；隨藥物濃度增加，HLEC生長抑制率增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。5mg/L和10mg/L濃度組：生長抑制率48h和24h>12h(P均<0.05)，但24h與48h間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；20mg/L濃度組：生長抑制率48h>24h>12h(P均>0.05)；30mg/L濃度組：生長抑制率48h>24h和12h(P均<0.05)，但12h

5、與24h間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；隨作用時間延長，HLEC生長抑制率增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。0.1％DMSO對照組：生長抑制率12h、24h、48h間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，提示0.1％DMSO對照組經(jīng)過48h作用后，HLEC生長抑制率無明顯變化。(2)FCM檢測表明，不同濃度的CUR作用于HLEC 24h后，早期細(xì)胞凋亡率均隨濃度增加而明顯增加，呈劑量-效應(yīng)關(guān)系，其順序為濃度30mg/L組>20mg

6、/L組>10mg/L組>5mg/L組和空白對照組，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05)，但5mg/L濃度組和空白對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。(3)不同濃度的CUR作用于HLEC 24h后觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，倒置生物相差顯微鏡下可見細(xì)胞體積縮小、細(xì)胞皺縮、細(xì)胞漿可見大量空泡、細(xì)胞核裂解；DAPI免疫熒光染色可見細(xì)胞核固縮、溶解碎裂、產(chǎn)生凋亡小體，呈現(xiàn)細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變，且隨藥物濃度增加，上述變化更加明顯。而對照組細(xì)胞形

7、態(tài)規(guī)則，細(xì)胞核呈現(xiàn)均勻的熒光染色。(4)免疫組織化學(xué)可見隨CUR濃度增加，用藥組Caspse-3蛋白的表達(dá)增強(qiáng)，其增強(qiáng)的順序為濃度30mg/L組>20mg/L和10mg/L組>5mg/L組>0mg/L組，與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而20mg/L和10mg/L濃度組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論:姜黃素對人晶狀體上皮細(xì)胞的增殖有抑制作用和誘導(dǎo)其凋亡的作用，且呈明顯的劑量．效應(yīng)與時間．效應(yīng)關(guān)系，