CTGF基因干擾對轉化生長因子β-,2-誘導的人晶狀體上皮細胞間質轉分化的調控研究.pdf

1、研究目的：后發(fā)障是現(xiàn)代白內障術后最常見的并發(fā)癥，后發(fā)障的發(fā)病機制至今尚未完全明確。上皮間質轉分化是后發(fā)障發(fā)生過程中主的要病理改變，轉化生長因子β(TGF—β)作為間質轉分化最有力的誘導因子，在后發(fā)障發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。阻斷TGF—β誘導的間質轉分化的生物學過程為后發(fā)障的防治提供了新的思路。結締組織生長因子(CTGF)是一種在纖維化過程中起重要作用的間質細胞生長因子，近年來CTGF在TGF—β誘導的一系列生物學過程，特別是間質轉分化過

2、程中的作用受到重視。本課題旨在總結以往研究TGF—β與后發(fā)障相關研究的基礎上，采用siRNA干擾這一高效、特異的基因沉默手段抑制體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞CTGF的表達，觀察基因干擾對TGF—β2誘導的上皮間質轉分化的影響，分析TGF—β2和CTGF在晶狀體上皮細胞間質轉分化過程中的作用及信號轉導機制，進一步明確后發(fā)障的發(fā)病機制，為基因治療后發(fā)障提供靶標。 研究方法：采用體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞株HLEB-3，用不同濃度的TG

3、F—β2處理細胞，應用免疫印跡法及RT—PCR觀察細胞CTGF表達及間質轉分化相關蛋白connexin43、a—SMA表達的影響。建立后發(fā)障離體研究模型，采用脂質體介導的siRNA干擾技術轉染HLEB-3細胞，特異性沉默CTGF的表達。應用免疫印跡、免疫熒光等方法觀察CTGF基因干擾對TGF—β2誘導的晶狀體上皮細胞間質轉分化及粘附功能的影響。 研究結果：TGF—β2能夠誘導體外培養(yǎng)人品狀體上皮細胞表達CTGF蛋白，CTGF在晶

4、狀體上皮細胞內的表達主要位于細胞漿。外源性TGF—β2及CTGF均能誘導人晶狀體上皮細胞發(fā)生間質轉分化。siRNA干擾能夠成功的從基因和蛋白水平抑制TGF—β2誘導的人晶狀體上皮細胞CTGF的表達，并且能夠抑制TGF—β2誘導的人晶狀上皮細胞間質轉分化和粘附作用及相關蛋白的表達。 研究結論：CTGF作為TGF—β2的下游分子，在TGF—β2誘導的晶狀體上皮細胞的間質轉分化過程中發(fā)揮關鍵作用?；蚋蓴_CTGF的表達能夠抑制TGF—