CTGF基因干擾對轉(zhuǎn)化生長因子β-,2-誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的調(diào)控研究.pdf

1、研究目的：后發(fā)障是現(xiàn)代白內(nèi)障術(shù)后最常見的并發(fā)癥，后發(fā)障的發(fā)病機制至今尚未完全明確。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化是后發(fā)障發(fā)生過程中主的要病理改變，轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF—β)作為間質(zhì)轉(zhuǎn)分化最有力的誘導(dǎo)因子，在后發(fā)障發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。阻斷TGF—β誘導(dǎo)的間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的生物學過程為后發(fā)障的防治提供了新的思路。結(jié)締組織生長因子(CTGF)是一種在纖維化過程中起重要作用的間質(zhì)細胞生長因子，近年來CTGF在TGF—β誘導(dǎo)的一系列生物學過程，特別是間質(zhì)轉(zhuǎn)分化過

2、程中的作用受到重視。本課題旨在總結(jié)以往研究TGF—β與后發(fā)障相關(guān)研究的基礎(chǔ)上，采用siRNA干擾這一高效、特異的基因沉默手段抑制體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞CTGF的表達，觀察基因干擾對TGF—β2誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的影響，分析TGF—β2和CTGF在晶狀體上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化過程中的作用及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制，進一步明確后發(fā)障的發(fā)病機制，為基因治療后發(fā)障提供靶標。 研究方法：采用體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞株HLEB-3，用不同濃度的TG

3、F—β2處理細胞，應(yīng)用免疫印跡法及RT—PCR觀察細胞CTGF表達及間質(zhì)轉(zhuǎn)分化相關(guān)蛋白connexin43、a—SMA表達的影響。建立后發(fā)障離體研究模型，采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的siRNA干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染HLEB-3細胞，特異性沉默CTGF的表達。應(yīng)用免疫印跡、免疫熒光等方法觀察CTGF基因干擾對TGF—β2誘導(dǎo)的晶狀體上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化及粘附功能的影響。 研究結(jié)果：TGF—β2能夠誘導(dǎo)體外培養(yǎng)人品狀體上皮細胞表達CTGF蛋白，CTGF在晶

4、狀體上皮細胞內(nèi)的表達主要位于細胞漿。外源性TGF—β2及CTGF均能誘導(dǎo)人晶狀體上皮細胞發(fā)生間質(zhì)轉(zhuǎn)分化。siRNA干擾能夠成功的從基因和蛋白水平抑制TGF—β2誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細胞CTGF的表達，并且能夠抑制TGF—β2誘導(dǎo)的人晶狀上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化和粘附作用及相關(guān)蛋白的表達。 研究結(jié)論：CTGF作為TGF—β2的下游分子，在TGF—β2誘導(dǎo)的晶狀體上皮細胞的間質(zhì)轉(zhuǎn)分化過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。基因干擾CTGF的表達能夠抑制TGF—