電針對慢性應(yīng)激模型大鼠HPA軸-Glu-NMDA受體-NO路徑調(diào)節(jié)作用機理的研究.pdf

1、抑郁癥是一種常見的精神疾病，其終生患病率高達15％-20％。抑郁癥居高不下的發(fā)病率以及造成的危害，已經(jīng)越來越引起醫(yī)藥衛(wèi)生界的重視。 近年來，治療抑郁癥的新藥層出不窮，但由于抑郁癥的發(fā)病機制很復(fù)雜，抗抑郁劑在臨床上出現(xiàn)療效滯后現(xiàn)象，并且大約有30％左右的重度抑郁癥人群對目前的各型抗抑郁劑沒有反應(yīng)，而且無法擺脫毒、副作用大，患者依從性差等問題。行之有效的治療抑郁癥的方法有著急迫而且巨大的需求。 針刺療法源于中醫(yī)學(xué)理論，立足于

2、整體觀念辨證論治，對機體產(chǎn)生廣泛的良性調(diào)節(jié)作用。近年來針灸治療抑郁癥越來越多的應(yīng)用于臨床，產(chǎn)生了較好的臨床療效，且未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)。針刺作為替代療法以其特有的優(yōu)勢受到人們的廣泛關(guān)注，但針灸抗抑郁療法的研發(fā)才剛剛起步，其產(chǎn)生療效的機制有待深入闡明，研究的深度和廣度都有待進一步提高。 我們的研究以HPA軸-Glu-NMDA受體-NO路徑為研究的切入點，選擇慢性應(yīng)激刺激誘發(fā)的抑郁模型大鼠作為研究對象。本文選擇臨床上治療抑郁癥行之有效的穴

3、位解釋治療機理，使基礎(chǔ)實驗研究更貼近臨床，以便服務(wù)于臨床。通過研究咆針對慢性應(yīng)激模型細(xì)胞因子、激素和相關(guān)受體等的影響，探討電針抗抑郁治療的作用機制。通過引入NMDA受體拮抗劑MK-801，從該路徑內(nèi)多個環(huán)節(jié)相互促進與制約的復(fù)雜關(guān)系中,探討電針對NMDA受體通道的作用途徑。從而研究電針抗抑邯作用的可能機制。 研究方法及結(jié)論： 1．采用7種不可預(yù)知的應(yīng)激原結(jié)合孤養(yǎng)方法建立大鼠慢性應(yīng)激模型。 結(jié)論： 此次實驗研

4、究我們選擇的慢性應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)模型，是在CUMS模型和孤養(yǎng)模型上的發(fā)展，此模型效果穩(wěn)定，可重復(fù)性高，接近抑郁癥的發(fā)病特。是研究抑郁較好、較有效的模型，目前被廣泛采用的抑郁癥動物模型。 2．通過開野試驗和游泳試驗，研究慢性應(yīng)激模型大鼠的行為學(xué)變化，從而檢驗造模成功與否及電針對慢性應(yīng)激模型大鼠行為學(xué)的影響。 結(jié)論： ①造模后大鼠的水平運動發(fā)生了顯著改變，模型組大鼠的活動度明顯降低，給予電針治療的慢性應(yīng)激大鼠活動性有所改

5、善，在水平運動次數(shù)上與模型組大鼠比較有顯著性差異(P<0.01)；造模后大鼠的垂直運動明顯減少，模型組大鼠的活動度明顯降低，給予電針治療的慢性應(yīng)激大鼠探究活動有所改善，在垂直運動次數(shù)上與模型組大鼠比較有顯著性差異(P<0.05)；況明電針可以改善抑郁模型大鼠活動性及探究興趣，療效與MK-801相當(dāng)。 ②造模后大鼠強迫游泳不動時間明顯增加，模型組大鼠的活動度明顯降低(P<0.01)，給予電針治療的慢性應(yīng)激大鼠的強迫游泳不動時間得到

6、改善，與模型組大鼠比較有顯著性差異(P<0.05)；MK-801對應(yīng)激導(dǎo)致的火鼠活動性降低也有明顯改善作用(P<0.05)。提示電針可以改善抑郁模型大鼠活動性，而這種改變的原因可能與動物與惡劣環(huán)境抗?fàn)幍囊庾R得到增強有關(guān)。 3．運用放免法檢測大鼠下丘腦CRF，垂體ACTH、腎上腺CORT、血清CORT。判斷慢性應(yīng)激大鼠是否存在HPA軸亢進及電針對HPA軸相關(guān)細(xì)胞因子及激素的影響。 結(jié)論：慢性應(yīng)激大鼠下丘腦CRF過度分泌(P

7、<0.05)。檢測模型組垂體的ACTH的分泌有增多的趨勢，但相對于空白組并不顯著，僅有增高的趨勢。模型組腎上腺、血清中CORT與空白組相比顯著增加(P<0.05)。說明下丘腦CRF作用于垂體的ACTH含量的增加最終導(dǎo)致了腎上腺和血液中CORT的升高。慢性應(yīng)激狀態(tài)下大鼠出現(xiàn)HPA軸亢進，電針可以降低CRF、CORT，進而對亢進的HPA軸產(chǎn)生良性調(diào)整作用。 4．運用放免法檢測大鼠海馬CORT，運用比色法檢測大鼠海馬內(nèi)Glu含量，判斷

8、慢性應(yīng)激大鼠是否影響海馬內(nèi)興奮性氨基酸含量及電針對海馬內(nèi)相關(guān)激素及神經(jīng)遞質(zhì)的影響。 結(jié)論： 經(jīng)長期慢性應(yīng)激刺激后，大鼠海馬內(nèi)CORT顯著升高(P<0.05)，谷氨酸含量明顯升高(P<0.05)。電針可以明顯降低大鼠海馬內(nèi)CORT、Glu的含量(P<0.05)，有效糾正海馬所處的應(yīng)激狀態(tài)，降低由HPA軸亢進而導(dǎo)致的對海馬的興奮性毒性作用。 5．運用免疫組化法檢測大鼠海馬內(nèi)NMDA受體含量，判斷慢性應(yīng)激大鼠是否存在N

9、MDA受體含量的改變，探討電針對海馬內(nèi)NMDA受體干預(yù)作用可能存在的機制。 結(jié)論： 慢性應(yīng)激條件下，大鼠海馬內(nèi)NMDA受體含量顯著增加，模型組明顯高于正常組(P<0.05)；電針可明顯降低慢性應(yīng)激模型大鼠海馬內(nèi)NMDA受體含量(P<0.05)；經(jīng)MK-801干預(yù)后，大鼠海馬內(nèi)NMDA受體含量亦明顯降低(P<0.05)。電針可通過調(diào)節(jié)海馬神經(jīng)元NMDA受體的含量，抑制慢性應(yīng)激性抑郁癥NMDA受體的過度激活控制NMDA受體通

10、道的開放，減輕細(xì)胞毒性作用。 6．運用熒光定量PCR法檢測大鼠海馬內(nèi)NR2A、NR2BmRNA含量，判斷慢悱應(yīng)激大鼠是否存在NMDAR受體含量改變，研究在HPA軸亢進狀態(tài)下，上位中楸海馬可能存在的分子病理學(xué)改變，分析電針如何通過干預(yù)海馬內(nèi)NMDAR受體而對海馬內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)通路產(chǎn)生調(diào)整作用。 結(jié)論： 模型組與空白組比較，NR2AmRNA含量顯著增加(P<0.01)，電針干預(yù)使慢性應(yīng)激狀態(tài)下大鼠海馬NR2AmRNA的表

11、達有顯著下調(diào)(P<0.01)，MK-801(P<0.01)可明顯下調(diào)海馬內(nèi)NR2AmRNA表達。模型組與空白紺比較，NR2BmRNA含量顯著增加(P<0.01)，電針干預(yù)使慢性應(yīng)激狀態(tài)下大鼠海馬NR2BmRNA的表達有顯著下調(diào)(P<0.01)，MK-801可明顯下調(diào)海馬內(nèi)NR2BmRNA表達(P<0.01)。電針通過調(diào)節(jié)海馬神經(jīng)元NR2A、NR2BmRNA的過量表達，控制NMDA受體通道的開放，從而減輕抑郁癥海馬的細(xì)胞毒性作用。

12、 7．運用放免法檢測大鼠海馬內(nèi)iNoS、NO<,3><'->含量，判斷慢性應(yīng)激大鼠是否存在一氧化氮含量的改變及電針改善海馬內(nèi)一氧化氮的毒性作用。 結(jié)論： 接受慢性應(yīng)激刺激后，模型組大鼠海馬組織iNOS和NO含量顯著升高，模型組與正常組比較有極顯著差異(P<0.01)；電針組與模型組比較有顯著差異(P<0.01)，海馬iNOS和NO含量明顯下調(diào)(P<0.01)；電針組與MK-801組無顯著差異。電針通過調(diào)節(jié)海馬神經(jīng)元NR2