Sunitinib對EGF誘導的HaCaT細胞增殖與凋亡的影響及作用機制.pdf

1、目的:
　　研究受體酪氨酸激酶抑制劑sunitinib對EGF誘導的HaCaT細胞(HaCaT/E)增殖與凋亡的影響及內(nèi)在機制。
　　方法:
　　1.采用細胞計數(shù)的方式檢測EGF對HaCaT細胞增殖的影響;
　　2.采用MTT檢測sunitinib對HaCaT/E細胞增殖的影響;
　　3.采用流式細胞儀檢測sunitinib對HaCaT/E細胞周期，WesternBlot檢測sunitinib對HaCaT/

2、E細胞周期蛋白cyclinD1和cyclinE1的表達水平的變化;
　　4.采用流式細胞儀檢測sunitinib對HaCaT/E細胞凋亡的影響，Western Blot檢測sunitinib對HaCaT/E細胞凋亡相關(guān)蛋白cleaved-PARP表達水平的變化，電鏡觀察sunitinib對HaCaT/E細胞凋亡形態(tài)學的影響;
　　5.采用Western Blot檢測sunitinib對HaCaT/E細胞Stat3信號途徑的影

3、響。
　　結(jié)果:
　　1.EGF呈時間依賴性的增加HaCaT細胞的數(shù)量，在3d的培養(yǎng)期間內(nèi)，用10 ng/mL EGF處理的HaCaT細胞在各個時間點數(shù)量顯著高于對照組細胞（P均＜0.05）;
　　2.MTT結(jié)果顯示sunitinib抑制HaCaT/E細胞的增殖，并呈濃度及時間依賴性（P均＜0.05）;
　　3.Sunitinib呈濃度及時間依賴性降低HaCaT/E細胞S期的比例，并抑制細胞周期蛋白cyclinD

4、1和cyclinE1的表達水平（P均＜0.05);
　　4.Sunitinib呈濃度及時間依賴性誘導HaCaT/E細胞的凋亡，凋亡相關(guān)蛋白cleaved-PARP的表達量隨sunitinib濃度的增高而出現(xiàn)表達量上調(diào)(P＜0.05)，電鏡顯示sunitinib處理HaCaT/E細胞24h后出現(xiàn)細胞體積變小，核染色質(zhì)邊集，濃縮，細胞質(zhì)空泡形成等一系列細胞凋亡征象;
　　5.Sunitinib預(yù)處理可顯著抑制EGF誘導的HaCa