氟對(duì)成釉細(xì)胞增殖與凋亡的作用及分子機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察正常小鼠及氟化物作用下小鼠切牙釉質(zhì)形成過程中成釉細(xì)胞形態(tài)的演變及不同時(shí)期成釉細(xì)胞增殖、凋亡的發(fā)生，研究成釉細(xì)胞形態(tài)及功能的改變?cè)诜腊Y形成過程中的作用，探討氟牙癥的發(fā)病機(jī)制。 方法：純系昆明小鼠60只隨機(jī)分為塒照組、低氟組和高氟組，實(shí)驗(yàn)組通過飲用含不同濃度的氟離子水建立小鼠氟牙癥模型，六周后斷頭處死小鼠，取小鼠下頜骨乙二胺四乙酸(Ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA)脫鈣四周，做

2、小鼠下切牙唇舌向連續(xù)病理組織切片及透射電鏡(transmission electronmicroscope，TEM)切片，采用HE染色技術(shù)及TEM觀察小鼠切牙成釉細(xì)胞不同時(shí)期形態(tài)及微觀結(jié)構(gòu)的變化；利用原位木端細(xì)胞凋亡檢測(TdT—mediated-dUTPnicked end labeling，TUNEL)技術(shù)觀察成釉細(xì)胞凋亡的發(fā)生，并且通過原位雜交技術(shù)以及免疫組織化學(xué)檢測技術(shù)，觀察小鼠切牙釉質(zhì)發(fā)生過程中成釉細(xì)胞中調(diào)控基因增殖細(xì)胞核抗原

3、(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)、細(xì)胞周期及細(xì)胞周期素D<,1>(CyclinD<,1>)、原癌基因c-myc及信號(hào)分子smaal4、轉(zhuǎn)化生長因子-β<,1>(transforming growth factor-β<,1>，TGF-β<,1>)骨形成蛋白-2(bone morphogeneticprotein-2，BMP-2)的表達(dá)。采用圖像分析軟件對(duì)免疫組化染色及原位組織雜交染色結(jié)果

4、進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果：HE染色結(jié)果表明在小鼠切牙形成過程經(jīng)歷了增殖、分泌、成熟等階段；實(shí)驗(yàn)組小鼠成釉細(xì)胞排列紊亂、高度變矮、牙釉質(zhì)厚度明顯變?。煌干潆婄R顯示實(shí)驗(yàn)組成釉細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變，細(xì)胞器減少，線粒體腫脹，一些細(xì)胞呈現(xiàn)凋亡跡象；TUNEL檢測結(jié)果證實(shí)實(shí)驗(yàn)組小鼠切牙成釉細(xì)胞在各期凋亡數(shù)量均增多，與對(duì)照組比較有差異；免疫組化及原位雜交結(jié)果可見在實(shí)驗(yàn)組成釉細(xì)胞中參與調(diào)控細(xì)胞增殖的因子PCNA、Cycllin D．表達(dá)較對(duì)照組減弱，

5、與對(duì)照組比較存在顯著性差異；原癌基因c-myc在實(shí)驗(yàn)組成釉細(xì)胞的分泌期表達(dá)增強(qiáng)，分泌前期表達(dá)較弱；Smad4、TGF-β<,1>、BMP-2的表達(dá)在實(shí)驗(yàn)組成釉細(xì)胞中表達(dá)較對(duì)照組減弱，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組比較有顯著性差異。 結(jié)論：釉質(zhì)形成過程中成釉細(xì)胞所經(jīng)歷的一系列形念學(xué)變化與其功能一斂；細(xì)胞因子PCNA、Cyclin D<,1>、c-myc、smad4、BMP-2及TGF-β<,1>等表達(dá)失淵可致成釉細(xì)胞在數(shù)量、形態(tài)及功能發(fā)生改變，通