外源性p53基因聯(lián)合不同時(shí)限放療對(duì)肺腺癌細(xì)胞A549作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、肺癌主要分為兩類:小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),其中后者占據(jù)全部肺癌的80％,可進(jìn)一步分類為腺癌(25％)、鱗癌(35％)、大細(xì)胞未分化癌(15％)和其他不常出現(xiàn)的亞型。雖然外科治療被認(rèn)定為大部分非小細(xì)胞肺癌的首選方法,但約有80％的肺癌患者在確診時(shí)已為局部晚期或晚期,從而失去了根治性手術(shù)治療機(jī)會(huì)。而放射治療則成為該

2、期患者重要的局部治療手段。放射敏感性是放射治療成敗的關(guān)鍵,采用各種藥物和生物學(xué)的手段增加腫瘤的放射敏感性是提高放療療效的重要方法。
　　 近年來(lái),隨著腫瘤分子生物學(xué)的發(fā)展,應(yīng)用基因藥物提高腫瘤放射敏感性受到廣大臨床研究者的關(guān)注。目前研究發(fā)現(xiàn)與放射敏感性相關(guān)基因很多,女ras,Rb,p53等,而p53基因作為目前研究最透徹,也是功能最強(qiáng)大的抑癌基因,存在于人體正常細(xì)胞,該基因突變與人類腫瘤的發(fā)生及放療敏感性密切相關(guān)。隨著目前對(duì)p5

3、3基因研究的深入,該基因在臨床治療中增加放療敏感性的作用不容小覷,并已廣泛應(yīng)用。
　　 目的：
　　 臨床工作中將由腺病毒載體所攜帶的野生型p53基因?qū)肽[瘤中,同時(shí)聯(lián)合放療,以期獲得最大的臨床收益。但放療對(duì)p53基因的蛋白表達(dá)及細(xì)胞殺傷作用有一定影響,對(duì)于用藥后的最佳放療時(shí)間安排目前尚定論,亟待研究。該研究旨在探討重組人腺病毒p53導(dǎo)入后不同時(shí)限放療對(duì)A549肺腺癌細(xì)胞p53蛋白表達(dá)和細(xì)胞殺傷作用的影響。
　　

4、 方法：
　　 將重組人腺病毒所攜帶的野生型p53注射劑加入已被證實(shí)部分存在p53基因缺失的人肺腺癌細(xì)胞株A549中,加藥后不同時(shí)間聯(lián)合射線照射(單次4Gy),通過(guò)MTT檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡以及western blot檢測(cè)野生型p53蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 腺病毒p53加入6h、24h和48h后放療組對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用顯著高于單純加藥組、加藥即刻放療組和加藥3h后放療組,P<0

5、.05。隨著加藥與放療間隔的延長(zhǎng),細(xì)胞凋亡率也逐漸升高,加藥即刻放療組的細(xì)胞凋亡率最小。加藥即刻放療組、加藥3小時(shí)后放療組其野生型p53蛋白表達(dá)明顯弱于6h、24h和48h后放療組(P<0.05)。盡管加藥后48h野生型p53蛋白表達(dá)最高,但與加藥6h和24h后放療組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 放療聯(lián)合腺病毒p53導(dǎo)入肺腺癌細(xì)胞所產(chǎn)生的最大殺傷作用可以選定在導(dǎo)入腺病毒p53基因后6h～48