導(dǎo)入外源性野生型p53基因?qū)Ω伟┘?xì)胞凋亡作用的研究.pdf

1、全文共三部分.第一部分,融合基因wtp53/PGFP構(gòu)建表達(dá)及對(duì)大鼠肝癌細(xì)胞的凋亡研究.目的：利用新型分子探針綠色熒光蛋白基因（GFP）,與野生型p53基因（wild-type p53 gene）構(gòu)建成融合基因,便于直接、實(shí)時(shí)、定位觀察p53在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及定位情況.結(jié)論：1、加用Plus試劑比單用lipofectAMINE不僅可以提高轉(zhuǎn)染效率,而且縮短轉(zhuǎn)染時(shí)間.2、在構(gòu)建融合基因過(guò)程中,選擇恰當(dāng)?shù)亩嗫寺∶盖形稽c(diǎn)進(jìn)行亞克隆技術(shù),省時(shí)、省

2、力、節(jié)省費(fèi)用.3、p53綠色融合蛋白可作為p53基因表達(dá)的直接標(biāo)記,便于直觀了解p53在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及定位情況.第二部分,導(dǎo)入外源性野生基因p53及合用TNF-α對(duì)肝癌細(xì)胞的凋亡作用及與Bax的表達(dá)關(guān)系研究.目的：通過(guò)補(bǔ)充外源性的野生型p53基因,觀察其對(duì)人肝癌Hep3B細(xì)胞的凋亡作用,并探討p53與Bax表達(dá)關(guān)系;并聯(lián)合應(yīng)用TNFα,觀察對(duì)凋亡的影響作用及抑制.結(jié)論：1、對(duì)于抑癌基因缺失或突變的細(xì)胞恢復(fù)野生型p53的活性,可以誘導(dǎo)凋亡

3、,促進(jìn)癌細(xì)胞死亡.2、p53通過(guò)上調(diào)Bax表達(dá)可能是促進(jìn)細(xì)胞凋亡的旁路之一.3、聯(lián)合應(yīng)用TNF-α后,肝癌細(xì)胞凋亡作用明顯,主要是由于TNF-α上調(diào)線粒體膜上的Bax以促進(jìn)凋亡,使Bax/Bcl-2比值增高而促進(jìn)凋亡發(fā)生.4、聯(lián)合應(yīng)用基因療法和細(xì)胞因子,可能是對(duì)肝癌癥進(jìn)行治療的有效手段.第三部分,人重組正義tRNA<'Ser(CGA)>基因的構(gòu)建表達(dá)及在Hep3B中對(duì)wtp53基因的作用研究.目的：通過(guò)構(gòu)建人重組正義tRNA<'Ser(

4、CGA)>基因?qū)53表達(dá)影響.結(jié)論：1、成功的構(gòu)建了與人類密碼子UCG相匹配的轉(zhuǎn)運(yùn)RNA（pSV2<,neo>tRNA<'Ser(CGA)>）,而UCG在人類利用率極低,提出了補(bǔ)充與罕見(jiàn)密碼子相匹配的轉(zhuǎn)運(yùn)RNA,從而提高其利用率,在轉(zhuǎn)染后翻譯水平提高蛋白表達(dá)的新思路.2、共轉(zhuǎn)染可以提高蛋白質(zhì)表達(dá)作用,可能與一過(guò)性提高啟動(dòng)子的活性有關(guān).3、該研究所用的tRNA<'Ser(CGA)>與空載體相比對(duì)提高p53蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異,提示單純補(bǔ)充