內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)移聯(lián)合順鉑對(duì)肺腺癌A549的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)移聯(lián)合順鉑對(duì)肺腺癌A549的實(shí)驗(yàn)研究姓名：季成申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：呼吸內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：凌春華20040401內(nèi)皮抑紊基因轉(zhuǎn)移聯(lián)合順鉑對(duì)肺腺痛A549的實(shí)驗(yàn)研究中文提要法證實(shí)Endostatin基因能有效表達(dá)mRNA。A549／Endo細(xì)胞(1105／m1)培養(yǎng)48h后，ELISA法測(cè)得上清液中內(nèi)皮抑素蛋白含量為348120pg／ml。MTT法顯示含內(nèi)皮抑素的上清液能明顯抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞EAhy926

2、細(xì)胞的生長(zhǎng)。流式細(xì)胞儀、原位細(xì)胞凋亡法顯示內(nèi)皮抑素可誘導(dǎo)EAhy926凋亡。同時(shí)檢測(cè)到內(nèi)皮抑素作用后的內(nèi)皮細(xì)胞Bcl2、Bcl，XL蛋白表達(dá)量下降。Caspase3水平升高，而Bax—mRNA表達(dá)水平無(wú)明顯變化。結(jié)論：逆轉(zhuǎn)錄病毒能高效介導(dǎo)內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)移，內(nèi)皮抑素基因表達(dá)產(chǎn)物能明顯抑制人血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，誘導(dǎo)凋亡是其作用機(jī)制之一，這種作用機(jī)制可能是通過(guò)下調(diào)Bcl2、BclX／L的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。關(guān)鍵詞逆轉(zhuǎn)錄病毒內(nèi)皮抑素基因血管內(nèi)皮細(xì)胞凋

3、亡第二部分內(nèi)皮抑素基因表達(dá)產(chǎn)物對(duì)肺腺癌A5492$胞的體內(nèi)外生物學(xué)影響目的：探討內(nèi)皮抑素基因表達(dá)產(chǎn)物對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞的體外生物學(xué)影響，及其對(duì)裸鼠肺腺癌A549移植瘤的生長(zhǎng)抑制作用。方法：培養(yǎng)A549／Endo細(xì)胞，48h后細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定細(xì)胞增殖能力，以不含內(nèi)皮抑素基因的A549細(xì)胞為對(duì)照。比較觀察內(nèi)皮抑索基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入A549細(xì)胞后，對(duì)細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響。分別建立A549、A549／Endo細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型，觀察比較二組瘤體體積，

4、常規(guī)病理觀察，免疫組化檢測(cè)微血管密度(MVD)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)陽(yáng)性率，DNA原位末端標(biāo)記(TUNEL)檢測(cè)瘤體細(xì)胞凋亡指數(shù)。結(jié)果：細(xì)胞記數(shù)法結(jié)果顯示A549／Endo細(xì)胞和A549細(xì)胞的體外生長(zhǎng)能力無(wú)顯著差異：在體研究顯示，表達(dá)有內(nèi)皮抑素的A549／Endo細(xì)胞，成瘤時(shí)間延長(zhǎng)，瘤體生長(zhǎng)速度減慢；光鏡下觀察A549細(xì)胞瘤體血管豐富，管壁完整，較少炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。而A549／Endo組瘤體血管稀少，有點(diǎn)片狀壞死；免疫組化