富硒溫泉水對(duì)增生性瘢痕成纖維細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、背景：
　　 增生性瘢痕是創(chuàng)傷后組織修復(fù)過度的結(jié)果，任何創(chuàng)傷的愈合均會(huì)伴有輕重不同程度的瘢痕形成。成纖維細(xì)胞是增生性瘢痕形成與增生的主要效應(yīng)細(xì)胞，燒傷發(fā)生后，燒傷創(chuàng)面的成纖維細(xì)胞大量增殖，作為肉芽組織的主要成分來填充傷口，從而促進(jìn)創(chuàng)面愈合，因此成纖維細(xì)胞功能狀態(tài)是影響增生性瘢痕發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)歸的主要因素，是增生性瘢痕組織形成的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前增生性瘢痕的非手術(shù)治療方法主要有加壓治療、激光治療、硅膠敷貼治療、放射治療以及藥物注射治

2、療等方法，但效果均不佳，因此有必要尋找一種安全、有效、經(jīng)濟(jì)、方便的治療方法。
　　 在臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，富硒溫泉水不但能夠促進(jìn)燒傷創(chuàng)面的愈合、提高患者的免疫力，而且浸浴之后的燒傷患者愈后生長(zhǎng)的瘢痕較軟，色澤淡，很少影響肢體功能導(dǎo)致殘疾的，但其具體作用機(jī)制尚不明確。為了進(jìn)一步研究富硒溫泉水浸浴抑制瘢痕生長(zhǎng)的機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)利用富硒溫泉水對(duì)體外培養(yǎng)的增生性瘢痕成纖維細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，采用直接計(jì)數(shù)法和MTT比色法以觀察對(duì)成纖維細(xì)胞增殖的影響，從

3、而初步探索富硒溫泉水抑制瘢痕生長(zhǎng)的機(jī)制。
　　 目的：
　　 增生性瘢痕最明顯的特征就是成纖維細(xì)胞的增生，臨床試驗(yàn)也證實(shí)富硒溫泉水能夠有效抑制瘢痕的生長(zhǎng)，為進(jìn)一步明確富硒溫泉水治療增生性瘢痕的作用機(jī)制，我們?cè)O(shè)計(jì)從體外增生性瘢痕患者中取出瘢痕組織進(jìn)行培養(yǎng)，然后采取富硒溫泉水進(jìn)行干預(yù)，觀察其對(duì)成纖維細(xì)胞增殖的影響，為富硒溫泉水抑制瘢痕增生提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，初步探討富硒溫泉水浸浴治療燒傷創(chuàng)面的作用機(jī)制。
　　 方法：

4、>　　 選取南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院燒傷科住院的整形患者，無菌取其增生性瘢痕采用改良的組織塊進(jìn)行成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，檢測(cè)活性大于90％后繼續(xù)傳代至第3-6代用于實(shí)驗(yàn)。
　　 直接計(jì)數(shù)法：取生長(zhǎng)良好的第3代細(xì)胞，制成2×106/ml的細(xì)胞懸液，分為四組，分別為富硒溫泉水組(A組)、自來水組(B組)以及蒸餾水組(即空白對(duì)照組)，D組為不加任何溶液的正常培養(yǎng)液組(即正常對(duì)照組)。采用24孔板培養(yǎng)，每3個(gè)孔為同一濃度同一溶質(zhì)培養(yǎng)基，其中A、B

5、、C三組最終濃度分別為10％、20％、30％。在37℃，體積分?jǐn)?shù)為5％的C02條件下培養(yǎng)到預(yù)定時(shí)間后消化、收集細(xì)胞，采用計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)。
　　 MTT比色法檢測(cè)：使用計(jì)數(shù)板將細(xì)胞密度調(diào)為5×107/L，接種于96孔培養(yǎng)板，每孔加入100μL的細(xì)胞懸液和100μL的DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞完全貼壁后棄去原液，分別加入含終濃度為10％、20％、30％的富硒溫泉水、自來水及蒸餾水的DMEM培養(yǎng)基(含體積分?jǐn)?shù)10％胎牛血

6、清)，以正常DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞作為空白對(duì)照組。倒置顯微鏡下觀察富硒溫泉水及空白組成纖維細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)情況。將培養(yǎng)的各組細(xì)胞放入96孔板后繼續(xù)放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，小心地使用吸液管去除原培養(yǎng)基，每孔加入20μLMTT溶液繼續(xù)培養(yǎng)4 h后棄去培養(yǎng)液，每孔加入150μL二甲基亞砜，置微孔振蕩器低速振蕩10min，用酶標(biāo)儀測(cè)定490 nin吸光度(A)，記錄數(shù)據(jù)并計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率。
　　 結(jié)果：
　　 1、在倒置相

7、差顯微鏡下觀察，富硒溫泉水培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量較少，細(xì)胞突起不同程度的變短或者缺失，細(xì)胞質(zhì)及胞核濃縮，隨著溫泉水濃度的增加，細(xì)胞存活狀況越差，
　　 2、計(jì)數(shù)的結(jié)果
　　 各實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)均少于正常培養(yǎng)基培養(yǎng)組，10％濃度自來水培養(yǎng)基組和10％濃度蒸餾水培養(yǎng)基組與正常培養(yǎng)基對(duì)照組的細(xì)胞增殖曲線走勢(shì)基本趨同，富硒溫泉水組及20％、30％自來水和蒸餾水組對(duì)成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)均有顯著增殖效應(yīng)；富硒溫泉水組與正常培養(yǎng)基組比較