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1、目的：探討應(yīng)用RNA干擾(RNAi)抑制人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞CTGF基因表達(dá)后，對(duì)成纖維細(xì)胞的增殖、凋亡、合成I型膠原蛋白(COL-I)及分泌纖維粘連蛋白(FN)的影響，從而為增生性瘢痕發(fā)生機(jī)制提供新的理論依據(jù)，為增生性瘢痕的治療提供新的靶點(diǎn)。
方法：1.設(shè)計(jì)針對(duì)人CTGF基因特異性的三條siRNA oligo，通過RT-PCR及Western blot檢測(cè)其在增生性瘢痕成纖維細(xì)胞中的干擾效果，從中篩選出一條最佳片段，并構(gòu)建
2、質(zhì)粒表達(dá)載體。2.重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞后，應(yīng)用CCK-8檢測(cè)成纖維細(xì)胞的增殖情況；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況。3.重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞后，應(yīng)用RT-PCR、Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后成纖維細(xì)胞合成COL-I及FN的情況。
結(jié)果：1.設(shè)計(jì)的特異性基因序列干擾增生性瘢痕成纖維細(xì)胞后，分別在mRNA及蛋白水平檢測(cè)CTGF的表達(dá)，結(jié)果篩選出具有最佳抑制效應(yīng)的序列C3。2.成功構(gòu)建重組質(zhì)粒C3-sh
3、RNA。3.重組質(zhì)粒C3-shRNA轉(zhuǎn)染人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡率明顯增加(P<0.05)，細(xì)胞增殖率明顯降低(P<0.05)。4.重組質(zhì)粒C3-shRNA轉(zhuǎn)染人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞可有效抑制成纖維細(xì)胞中COL-I和FN的表達(dá)。
結(jié)論：1.siRNACTGF作用于人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞后能特異性地抑制CTGF的表達(dá)。2.下調(diào)CTGF基因表達(dá)可促進(jìn)增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的凋亡和抑制成纖維細(xì)胞的增殖，并能有效抑制增生性瘢痕
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