矮牽牛（Petunia hybrida）PMADS9基因功能分析.pdf

1、MADS-box基岡是指含有保守的DNA結(jié)合域MADS盒的轉(zhuǎn)錄凋控因子，它們廣泛存在于真核生物界。MADS是由兒個(gè)最初發(fā)現(xiàn)的成員——酵母MCM1、擬南芥AGAMOUS、金魚草DIFICIENS和人類SRF——的首字母組合而來。MADS-box基因是一類重要調(diào)節(jié)基因，在植物發(fā)育(尤其是花器官發(fā)育以及同源異型轉(zhuǎn)換中)過程中扮演著十分重要的角色。分離并研究MADS-box基岡，將有助于探明植物生殖發(fā)育的分子模式，并為觀賞植物和花卉品種的基因工

2、程改良奠定基礎(chǔ)。 AGL15是MADS-box基因家族成員，研究顯示具有延緩植物花朵衰老的功效，作用途徑可能獨(dú)立于乙烯介導(dǎo)的調(diào)控衰老途徑。PMADS9是最近在觀賞花卉矮牽牛中發(fā)現(xiàn)的AGL15亞家族基因，其功能尚未報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將PMADS9基岡導(dǎo)入矮牽牛，研究了PMADS9基因在矮牽牛中超量和反義表達(dá)對(duì)開花時(shí)間和花朵衰老的影響。從而確定PMADS9基因的功能。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.矮牽牛植物材料的選擇及培養(yǎng)

3、激素研究 通過對(duì)不同矮牽牛材料、不同植物激素組合的比較實(shí)驗(yàn)，確定了最適的矮牽牛材料AO1和最適的矮牽牛A01葉片再生培養(yǎng)基：MS+BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L+蔗糖3％+瓊脂粉0.7％，pH5.8，生根培養(yǎng)基：1/2MS+蔗糖3％+瓊脂粉0.7％，ph5.8。 2.矮牽牛遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化 通過不同農(nóng)桿菌二次活化菌液濃度和不同侵染時(shí)間的比較實(shí)驗(yàn)，確定了最適的二次活化菌液濃度OD600=0.5-0.

4、8，最適的浸染時(shí)間30S。抑制葉盤愈傷分化的篩選壓，抑制生根篩選壓Km濃度為30mg/L。 3.PMADS9基因?qū)Π珷颗５倪z傳轉(zhuǎn)化 利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將pBL-PMADS9(+)、pBIN-PMADS9(-)導(dǎo)入矮牽牛中，分別獲得7個(gè)獨(dú)立的轉(zhuǎn)pBl-PMADS9(+)矮牽?？剐灾晗岛?個(gè)獨(dú)立的轉(zhuǎn)pBIN-PMADS9(-)矮牽?？剐灾晗?，其中7個(gè)轉(zhuǎn)pBl-PMADS9(+)株系全部存活并開花，3個(gè)轉(zhuǎn)pBIN-PMADS9(

5、-)株系存活并開花。 4.轉(zhuǎn)基因植株表型形狀分析及PMADS9基因功能分析 比較了陽(yáng)性植株與未轉(zhuǎn)化植株從移栽到開花的時(shí)間，結(jié)果顯示PMADS9基因超量表達(dá)對(duì)推遲矮牽牛開花有一定作用。比較了花朵所在的獨(dú)立花枝的葉片數(shù)和花枝高度，顯示可見PMADS9基因?qū)﹂_第一朵花時(shí)花枝葉片數(shù)有一定影響。而開第一朵花時(shí)花枝高度未見影響。比較了各轉(zhuǎn)化株系與未轉(zhuǎn)化株在活體花和鮮切花衰老時(shí)間上的著異，結(jié)果顯示，PMADS9基因?qū)铙w花衰老有一定