食管鱗癌中SOX7基因表達及其甲基化狀態(tài)研究.pdf

1、目的:我國是食管癌的高發(fā)國，由于食管癌臨床表現(xiàn)的隱匿性，多數(shù)患者就診時已屬中晚期，預后差，嚴重威脅著人們的健康。因此，探索食管癌的發(fā)病機制及尋找有效的基因治療靶點，是降低食管癌發(fā)病率及死亡率的重要途徑。
　　食管癌發(fā)病是多因素、多階段、多基因變異的復雜過程，在分子水平上涉及眾多原癌基因、抑癌基因以及蛋白質(zhì)的改變?；虻谋碛^遺傳學修飾是不涉及DNA序列改變的一種修飾形式，其中基因甲基化是最常見的修飾途徑。研究表明許多腫瘤組織中均存在

2、SOX基因家族的異常表達，而SOX基因家族又與Wnt/β-catenin信號通路有著密切的關(guān)系。SOX7基因作為此家族的重要成員日益引起研究者的重視。序列檢索發(fā)現(xiàn)，SOX7基因的啟動子區(qū)存在多個CpG島，推測該基因也可能存在甲基化修飾現(xiàn)象。本研究通過檢測食管癌細胞系和食管癌患者癌組織及相應癌旁組織中WNT通路相關(guān)基因SOX7啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)，并分析與該基因mRNA及蛋白表達的相關(guān)性，探討SOX7基因在食管鱗癌中的作用及表達調(diào)控機制。

3、
　　方法:
　　1應用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(reverse transcription polymerase chainreaction，RT-PCR)技術(shù)分別檢測DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-aza-dC處理前后的食管癌細胞系(Yes-2、EC109、TE1、T.TN)以及58例食管鱗癌組織及癌旁組織中SOX7基因的mRNA表達情況。
　　2應用免疫組織化學(immunohistochemistry) SP法檢測58例

4、食管鱗癌組織及癌旁組織中SOX7蛋白的表達情況。
　　3應用甲基化特異性PCR(methylation specific polymerase chain reaction，MSP)技術(shù)分別檢測5-aza-dC處理前后的食管癌細胞系和58例食管鱗癌組織及癌旁組織中SOX7基因的甲基化狀態(tài)。
　　4運用統(tǒng)計軟件SPSS13.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。
　　結(jié)果:
　　1食管鱗癌中SOX7基因mRNA、蛋白表達以及與各

5、臨床指標之間的關(guān)系
　　1.1食管鱗癌及相應癌旁組織中SOX7基因mRNA表達情況及與各臨床指標之間的關(guān)系
　　SOX7基因mRNA在食管鱗癌組織中的相對表達量為0.36±0.09，在癌旁組織中的相對表達量為0.61±0.13，食管鱗癌組織中SOX7基因的mRNA表達量明顯低于癌旁組織，其差異具有統(tǒng)計學意義(t=12.772，P＜0.05)。在食管鱗癌患者中，SOX7的mRNA表達與患者腫瘤TNM分期、病理分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均

6、有關(guān)(P＜0.05)。
　　1.2食管鱗癌及相應癌旁組織中SOX7基因蛋白表達情況及與各臨床指標之間的關(guān)系
　　58例食管鱗癌組織中有16例SOX7基因蛋白表達陽性，陽性表達率為27.6％(16/58);而相應癌旁組織中有42例SOX7蛋白呈陽性表達，陽性表達率為72.4％(42/58)，食管鱗癌組織中該基因蛋白陽性表達率顯著低于相應癌旁組織(x2=16.004，P＜0.01)。在食管鱗癌中，SOX7蛋白表達與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)

7、移有關(guān)(P＜0.05)，而與腫瘤組織分期和分級無關(guān)(P＞0.05)。
　　2食管鱗癌中SOX7基因表達下調(diào)的機制研究
　　2.1 SOX7 mRNA在食管癌細胞系中經(jīng)5-aza-dC處理前后的表達情況
　　檢測Yes-2、EC109、TE1、T.TN四株食管癌細胞系中SOX7基因mRNA表達情況，發(fā)現(xiàn)TE1中SOX7基因mRNA表達呈陽性，Yes-2、EC109、T.TN細胞株中該基因mRNA表達缺失，經(jīng)5-aza-d

8、C處理培養(yǎng)后，四株細胞系均檢測出SOX7 mRNA的表達。
　　2.25-aza-dC處理前后食管癌細胞系中SOX7基因的甲基化狀態(tài)
　　在5-aza-dC處理前Yes-2、EC109、T.TN細胞株中SOX7基因表現(xiàn)為高甲基化狀態(tài)，應用甲基化抑制劑5-aza-dC處理后該四種細胞株中SOX7基因均表現(xiàn)為非甲基化狀態(tài)。在5-aza-dC處理前TE1細胞株表現(xiàn)為不完全甲基化狀態(tài)，應用甲基化抑制劑5-aza-dC處理后表現(xiàn)為非甲

9、基化狀態(tài)。
　　2.3食管鱗癌組織中SOX7基因的甲基化狀態(tài)及與各臨床指標之間的關(guān)系
　　在食管鱗癌組織中SOX7基因的甲基化陽性率(53.4％，31/58)顯著高于癌旁組織中該基因甲基化陽性率(29.3％，17/58)(x2=8.652，P=0.000)。低分化鱗癌組SOX7基因啟動子區(qū)甲基化發(fā)生率(71.2％，23/31)顯著高于高中分化鱗癌組甲基化發(fā)生率(29.6％，8/27)（x2=11.518，P＜0.05）;在有

10、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組SOX7基因啟動子區(qū)的甲基化發(fā)生率(69.0％，20/29)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的甲基化發(fā)生率(37.9％，11/29)(x2=5.613，P＜0.05);根據(jù)TNM分期進行統(tǒng)計分析，Ⅰ+Ⅱ期食管鱗癌組中SOX7基因啟動子區(qū)的甲基化發(fā)生率(41.5％，17/41)顯著低于Ⅲ+Ⅳ期食管鱗癌組SOX7基因啟動子區(qū)的甲基化發(fā)生率(82.4％，14/17)(x2=8.074，P＜0.05);SOX7基因啟動子區(qū)甲基化率與食管鱗癌患

11、者的年齡、性別、吸煙、飲酒等無關(guān)(P＞0.05)。
　　2.4食管鱗癌組織中SOX7 mRNA、蛋白表達以及基因甲基化之間的關(guān)系
　　SOX7基因發(fā)生甲基化的食管癌組織mRNA相對表達量為0.28±0.08，顯著低于未發(fā)生甲基化的食管癌組織中mRNA的相對表達量0.41±0.08，（t=-6.249，P＜0.05）。SOX7基因啟動子區(qū)發(fā)生高甲基化的食管鱗癌組織SOX7蛋白表達陽性率(12.9％，4/31)顯著低于未發(fā)生甲基

12、化的食管鱗癌組織SOX7蛋白表達陽性率(44.4％，12/27)(x2=7.187，P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1食管鱗癌組織中SOX7基因mRNA、蛋白的表達低于癌旁組織，提示食管鱗癌中SOX7基因可能為候選抑癌基因，其表達下調(diào)可能是食管鱗癌的發(fā)病機制之一。
　　2 SOX7基因在多數(shù)食管癌細胞株中表達降低或缺失，并呈現(xiàn)高甲基化狀態(tài)，在經(jīng)5-aza-dC處理后可逆轉(zhuǎn)高甲基化狀態(tài)并使SOX7恢復表達，提示甲基化可